BAPAT qPCR Mix(多重荧光探针)

特别提示：包括BAPAT qPCR Mix(多重荧光探针)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：BAPAT qPCR Mix(多重荧光探针)
英文名称：2× BAPAT Multiplex Probe qPCR Mix
产品货号：MT2003
产品规格：1ml|5ml|25ml

2×BAPAT Multiplex Probe qPCR Mix是将化学修饰的热启动RAPA3G DNA聚合酶、反应Buffer、dNTP等试剂预混在一起，是一种2×浓度的单组分预混试剂。该制品不含有ROX校正染料，适用于各种荧光标记探针，并且适用于各种定量PCR机型。优化的反应缓冲液，使得该制品不仅可用于单重的探针法定量PCR，还允许进行多重定量PCR（MultiPlex qPCR）检测，该制品可进行4重以上的定量PCR检测。

制品中的RAPA3G DNA聚合酶为第三代DNA聚合酶，其具有最高的杂质耐受性，其对乙醇、胍盐、肝素、血清、植物多糖多酚具有极高的耐受性，因此可用于粗样品的直接定量PCR检测(Direct PCR)。该酶经化学法修饰，在50℃以下100%无活性，只有95度条件下加热5min后才能完全恢复酶的活力。因此该系统可以有效抑制非特异性PCR扩增，极大的提高了PCR扩增特异性。

产品特点：
 

• RAPA3G DNA聚合酶强劲的扩增性能，可用于4重以上的qPCR扩增。


• 杂质高耐受性，使用各种gDNA和cDNA，具有最佳的扩增成功率。


• 高灵敏度，宽范围的动态检测（>7个数量级）。


• 反应效率在95-110%之间，高准确度和重现性。


• 扩增程序40min内完成，具有10s扩增1kb的快速能力。


• 在不同的富含AT和GC目标物上产生更高的荧光检测。

产品组成：
 

组分	1ml	5ml	25ml
2×BAPAT Multiplex Probe qPCR Mix	1ml	1ml×5	25ml

保存：-20℃可保存3年，该试剂经30次冻融后性能无下降，因此不使用时请置于-20℃避光保存。

反应实例：
下图是分别以nCoV S基因质粒（蓝线- FAM通道）、nCoV N基因质粒（绿线- VIC通道）、nCoV ORF1ab基因质粒（红线- Cy5通道）和人GAPDH内参Hela cDNA(黄线- ROX通道）为模板，四对引物和四条探针在同一体系内进行检测，模板均使用10⁸～10²copy/Test。
A为四重检测扩增曲线和标准曲线；
C-E为单独每一个通道的性能展示。

图A

图B

图C

图D

图E


结果可见该RAPA3G Multiplex Probe qPCR Mix在7个数量级的动态检测中表现出卓越的扩增性能，各个通道之间区分良好。

操作方法：
 

• 按照如下组分配制20μl PCR反应体系：
  
   

  成分	用量	终浓度
  2×RAPA3G MultiPlex Probe qPCR Mix	10μl	1×
  Primer F1 (20μM)	0.1-0.4μl	0.1-0.4μM
  Primer R1 (20μM)	0.1-0.4μl	0.1-0.4μM
  Probe1 (20μM)	0.1-0.4μl	0.1-0.4μM
  其它引物和探针	X	-
  DNA模板	0.5~2μl	-
  ddH2O	至20μl	-

  
  
  关于引物和探针的使用说明：
   
  • 在进行单重qPCR检测时，通常引物和探针用量在0.2μl（0.2μM）时一般具有较高的效果。
  
  
  • 在进行多重定量PCR时，通常首先进行单重检测，通过单重检测结果来评估引物和探针的效率、特异性等情况后，再进行引物、探针组合进行多重检测。


 
• 进行Real-Time PCR反应，通常采用两步法，程序如下：
  
   

  步骤	循环数	温度	时间	过程	说明
  Stage 1	1	95℃	5min	热启动
  Stage 2	40	95℃	5sec	变性
  		60℃	30sec	退火/延伸	收集信号



 
• 在多数情况下，采用两步法程序可获得理想的扩增效果，在无法达到预期理想效果的情况下，也可采用三步法PCR程序，程序如下：
   

  步骤	循环数	温度	时间	过程	说明
  Stage 1	1	95℃	5min	热启动
  Stage 2	40	95℃	5sec	变性
  		55℃	10sec	退火
  		72℃	30sec	延伸	收集信号



 
• 反应结束后确认Real-Time PCR的扩增曲线和标准曲线。

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货号	名称	规格
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