Bst DNA聚合酶4.0

特别提示：包括Bst DNA聚合酶4.0在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Bst DNA聚合酶4.0
英文名称：Bst DNA/RNA Polymerase 4.0 (8U/μl)
产品货号：MT0116
产品规格：1600U|16KU

Bst DNA/RNA聚合酶4.0为Bst DNA聚合酶2.0(货号：MT0028)和极其耐热反转录酶（耐受65℃，货号：MT0120）的混合品，该酶适用于RNA的LAMP反应。与Bst DNA/RNA聚合酶3.0相比，其反转录活性提高了近100倍，可以检测低灵敏度的RNA分子。该酶在以RNA为模板的LAMP实验中，做为推荐用酶，其扩增能力高于Bst DNA/RNA聚合酶3.0。除此外，Bst4.0 DNA/RNA Polymerase同样可以进行DNA模板的LAMP扩增。

应用：
DNA/RNA等温扩增；
富含GC结构的快速测序；
微量模板DNA的快速测序。

产品组成：
 

组分	1600U	16000U
Bst DNA/RNA聚合酶4.0(8U/μl)	200μL	1mL×2
10×Bst Buffer	1mL×2	1mL×20
100mM MgSO4	500μL	1mL×5

储存条件：-20℃可保存3年。

酶含量：1μl的Bst DNA/RNA聚合酶4.0中包含8U的Bst DNA/RNA聚合酶2.0和20U的极耐热反转录酶。

应用实例：
1．应用Bst DNA/RNA聚合酶3.0（货号：MT0029）和Bst DNA/RNA聚合酶4.0（货号：MT0116）以A549细胞RNA为模板，进行SYBR Green法RT-LAMP扩增，比较如下：


2．分别用Bst DNA聚合酶2.0（MT0028）、Bst DNA/RNA聚合酶3.0（MT0029）和Bst DNA/RNA聚合酶4.0（MT0116）以A549细胞RNA为模板，进行RT-LAMP扩增后，琼脂糖凝胶电泳，M为DNA Marker 10000，比较如下：


使用方法：

1．按以下组分配制反应液
 

成分	用量
Bst DNA/RNA聚合酶4.0	0.25~1μl
10×Bst Buffer	2.5μl
*100mM MgSO4	X μl
dNTP Mixture (10mM each)	3.5μl
模板DNA or RNA	1ng~1μg
**10X Primers	2.5μl
ddH2O	Up to 25μl

*MgSO4的使用浓度为6~10mM浓度，1×Bst Buffer中已包含6mM MgSO4，必要情况下再调整MgSO4用量，首次实验不建议进行调整。
**10X Primers：16μM FIP/BIP,2μM F3/B3,4μM LoopF/B each。

2．60～65℃，30~60min;98℃ 15min失活。

根据您的关注的Bst DNA聚合酶4.0，具有反转录活性的Bst DNA聚合酶，Bst DNA/RNA聚合酶4.0，Bst4.0 DNA聚合酶，您可能还对以下产品有需求：



名称：dNTP溶液(10mM)
货号：BTN51208B
规格：0.5mL
本产品是dATP、dTTP、dGTP、dCTP四种核苷酸的混合液，每种核苷酸的浓度为10mM，纯度在98%以上(HPLC检测)，不含DNA内切酶、DNA外切酶、RNA酶和磷酸酶的污染，可以直接用于PCR、RT-PCR、cDNA合成、DNA测序、DNA探针标记等反应。使用浓度根据具体的反应决定，请参考相关手册。



储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

DNA为何使用2"-脱氧核糖和胸腺嘧啶？
 DNA为何不选择现成的光合作用产物核糖和合成RNA的原料尿嘧啶(uracil)分别作为其糖分子和碱基，而去选择需要额外的合成步骤才能得到的2"-脱氧核糖和胸腺嘧啶(thymine)，其原因何在呢？目前的主流观点是：DNA不能选择核糖的原因之一是由于核糖2"位置上的OH基团会使得到的双螺旋骨架结构不均匀、不平行，难以有效地折叠进染色体结构中，而使用2"-脱氧核糖则能得到均匀平行的双螺旋结构；原因之二是核糖2"位置上的OH基团会对邻近的磷酸二酯键进行分子内亲核攻击，降低分子的稳定性，而对遗传物质来说稳定性十分重要，所以DNA选择了失去分子内亲核攻击能力的2"-脱氧核糖。对信使分子而言，稳定性并不重要，所以RNA仍然使用核糖。
 DNA使用胸腺嘧啶的原因是DNA中的胞嘧啶(cytosine)会缓慢水解变成尿嘧啶，如果尿嘧啶也是DNA的正常组成成份，则DNA修复系统就不能区分哪些尿嘧啶是正常的，哪些是需要修复的。使用胸腺嘧啶(比尿嘧啶分子多一个甲基)不但能保持跟尿嘧啶一样的形成碱基对的能力，同时又能跟尿嘧啶区别开来，使DNA分子中出现的任何尿嘧啶都能被尿嘧啶DNA糖苷酶(uracil-DNA glycosylase)发现和修复。

名称：即用型PCR试剂盒(染料法)
货号：BTN90408
规格：1mL
本产品是基于荧光染料检测的即用型PCR试剂盒，可以对靶片段进行实时定量PCR分析（quantitative PCR、qPCR）。产品含有经过优化的缓冲液组分、Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2及新型荧光染料GreenDNA等所有实时定量PCR所需要的成分，用户只需加入模板和引物即可进行实时定量PCR反应和HRM分析，具有广泛的用途。

产品特点：
1.方便，用户只需准备模板和引物既可以进行实时定量PCR实验和HRM（High Resolution DNA Melt Curve Analysis）分析。而基于SYBR Green I和LC Green染料的qPCR mix则不能同时用于上述两种实验。
2.使用第三代饱和型荧光染料，信号强，不会抑制PCR反应。
3.快捷，即用型的预配液使加样操作步骤大大简化，避免了交叉污染，降低实验误差。
4.各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。能检测到浓度为50拷贝/mL的靶分子。

使用方法：
 

• 以20μL的qPCR反应体系为例：在一干净的PCR管中，加入下列成分：
  
   

  反应体系成分	20μL体系	终浓度
  2×GreenDNA qPCR MagicMix	10μl	1×
  自备引物一a	x μl	0.1-0.5μM
  自备引物二a	x μl	0.1-0.5μM
  自备模板a	xμl
  自备ROXb	2μl	根据不同仪器选择
  补超纯水到	20μl

  
  放入荧光PCR仪中进行扩增，并在退火或延长步骤中记录荧光信号。
  
  注意：
  a．通常引物浓度以0.2μM可得到较好结果，可以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考；通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
  
  b．ROX校正染料：如果使用ABI公司的7500，7700和7900三种型号的荧光
  PCR仪器，则需用自备的ROX进行Ct值校正。
  对ABI 7700和7900，ROX的最佳浓度为1×（即在每20μL反应体系中加2μL 10×ROX）。
  对ABI 7500，ROX的最佳浓度为0.05-0.1×（每20μL反应体系加0.1-0.2μL 10×ROX；也可将10×ROX稀释到1×，然后每个反应体系加入1-2μL 1×ROX）。ROX会在溶解曲线中产生噪音，因此，如果出现了杂峰，将软件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”选项取消打勾，然后重新分析数据。
  对于iCycler IQ，MJ Opticon，MJ Chromo4，MX3000，MX4000,RotorGene3000，RotorGene 6000和LightCycler 480等型号的荧光PCR
  仪器，ROX不是必须的，但加入的话也不会影响整个PCR分析。
• 循环步骤：根据扩增子的性质和仪器性能，从以下三个过程中任选一个进行扩增
  
  A：两步快速循环法：适用于引物Tm值设计为60℃的反应
   

  步骤	温度	时间	循环数
  酶活化	95℃	10min	1
  变性	95℃	15s	35～40
  退火&延伸	60℃	1min

  
  注意：本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10min条件下实现酶的活化。退火温度请以60-64℃作为设定范围的参考，发生非特异性反应时，可提高退火温度。
  
  B：三步快速循环法：适用于延伸步骤温度高于退火步骤的PCR（长引物PCR）
   

  步骤	温度	时间	循环数
  酶活化	95℃	10min	1
  变性	95℃	10s	35～40
  56-64℃a	60℃	30s
  延伸	72℃b	32s

  
  注意：
  a．退火温度：建议采用两步法PCR，退火温度60℃进行反应。若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考。若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，三步法的退火温度请以56℃-64℃的范围作为设定参考。
  b．延伸温度：延伸温度设为72℃通常可以提高扩增效率。但是，对于AT含量大于70%的扩增子来说，延伸温度设为60℃为宜。
• 数据采集
  具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在没结合DNA时，最大吸收光谱在471nm，结合DNA时的最大吸收光谱在500nm，最大发射光谱在530nm。

其他注意事项：
1.如果使用iCycler，可以不加入FAM。
2.如果使用Roche LightCycler的玻璃毛细管进行PCR，需加入终浓度为0.5mg/mL的自备BSA。

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货号	名称	规格
BTN131176	石蜡包埋组织直接RT-PCR试剂盒(免RNA提取)	30次
BTN130840	硫酸镁溶液(PCR级MgSO4溶液)	5mL
YT377	富含GC PCR Buffer	2ml
JN0035	2×RoomTop Taq PCR MasterMix	1ml×5
QN0524	dTTP(100mM)	400μl
QN2077	2×PCR Mastermix(SYBR Green)	50T(1.25ml)|200T(5ml)

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