mRNA纯化试剂盒

特别提示：包括mRNA纯化试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：mRNA纯化试剂盒
英文名称：mRNA Isolation Kit
产品货号：BTN80817
产品规格：25T

本产品就是基于此原理开发的、专门用于从总RNA中提取mRNA的试剂盒。

开发背景：
构建cDNA文库、、蛋白质体外翻译和RT-PCR检测稀有的mRNA等研究常常需要从总RNA中分离mRNA。mRNA只占总RNA的1%左右，但由于带poly（A）尾巴，所以可以通过与Oligo（dT）纤维素的亲和结合而与其他RNA（如rRNA、tRNA等）分离开。

试剂盒特点：
 

• 一站式，即开即用，非常方便。


• 一次可以处理约10-15μg总RNA，从中可得0.1-0.5μg左右的mRNA。


• Oligo（dT）纤维素吸附能力强，每克可以吸附50-80 OD的mRNA，相当于2000-3000μg mRNA。


• 离心法、只需要离心就可以完成，免去了常规的灌柱、洗柱等繁琐操作。


• 得到的mRNA可以直接用于构建cDNA文库、蛋白质的体外翻译和RT-PCR。


• 本试剂盒足够25次微量mRNA提取实验。

试剂盒组成：
 

组分	规格
结合液	100mL
Oligo(dT)纤维素	25mg
RNase-free水	10mL
微量核酸沉淀剂	10mL

运输及保存：
常温运输，收到货后Oligo(dT)纤维素最好放-20℃长期保存，有效期一年。

使用方法：
本产品提供25mg Oligo(dT)纤维素，每克Oligo(dT)纤维素能够结合50-80OD的mRNA。
 

• 将250μL结合液加入到装有25mg Oligo(dT)纤维素的离心管中。


• 洗涤纤维素：取10μL（相当于1mg Oligo (dT)纤维素）与0.5mL结合液混匀，室温放置5分钟。10μL相当于1mg Oligo (dT)纤维素。剩余部分放-80℃保存。1000g离心30秒，小心吸弃结合液后留Oligo (dT)纤维素沉淀待用。


• 将自备的总RNA 100μL（如果体积不足100μL，用RNase-free水补足），65℃加热5分钟。


• 加入等体积（100μL）的结合液，混匀后冷却到室温。


• 全部转移到装有Oligo(dT)纤维素的离心管中，混匀后室温放置5分钟，期间颠倒混匀数次。


• 4℃ 1000g离心5分钟，小心将上清转移到一个离心管中。此上清液是去除了mRNA的总RNA。可以-80℃保存作为阴性对照。如果mRNA回收失败也可以再次用于纯化。


• 洗涤一次：加入0.5mL结合液，混匀后4℃ 1000g离心5分钟，小心弃上清。


• 重复上步的洗涤步骤2-4次。


• 在加入50μL RNase-free水，混匀后4℃ 1000g离心5分钟，小心收集上清（mRNA）。


• 重复上步1次。


• 将各次收集的mRNA混合，即为mRNA溶液。


• 按微量核酸沉淀剂的方法沉淀mRNA，具体操作如下：


• 按2:1的比例将微量核酸沉淀剂与mRNA溶液混合。
  注意：微量核酸沉淀剂取用前需要摇匀。


• 室温15000g离心10分钟。


• 弃上清后加自备的75%乙醇1mL，振荡混匀。


• 15000g离心5分钟，弃上清。


• 再短暂离心后小心吸弃上清，沉淀即为回收的mRNA沉淀，可溶于RNase-free水中直接使用或放-80℃保存。

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名称：软骨RNA柱式提取试剂盒
货号：BTN101121
规格：50次
本试剂盒专门从各种软骨组织样品中快速提取总RNA的试剂盒，它能有效克服传统TRIzol方法提取软骨组织RNA时，十分容易产生糖蛋白和酸性多糖污染这一缺点。

试剂盒特点：
1. 能有效去除糖蛋白、粘蛋白污染，OD260/280一般均在1.9以上。
2. RNA产率一般为5-15μg/100mg。
3. 操作简单，整个提取过程一般只需要10 多分钟。
4. 得到的RNA可以直接用于RT-PCR、Northern杂交、mRNA 纯化、Primer Extension、RNA Protection、in vitro translation等研究。

试剂盒组成：
 

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA 洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。溶液B需4℃保存。

使用方法：
1. 先将50-200mg 新鲜或冷冻的软骨组织液氮研磨成粉，加入1mL溶液A溶解(溶液A使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并摇晃混匀)，然后将研磨物转移到新的1.5mL离心管中，振荡混合30秒。也可以将软骨组织剪碎后与溶液A一起用Polytron 匀浆机(内切式匀浆机)匀浆5-20秒，再转移到1.5mL离心管中。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。
2.在离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备氯fǎng，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
3.室温12000～15000g离心3～5分钟，两相间将有约5-10 毫米厚的细胞破碎物。
4. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100μl上清液不取。
5. 加入等体积的溶液C，充分颠倒混匀。
6. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
7. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 加0.7mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 加0.3mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。
10.室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
11. 将离心吸附柱转移到自备的RNase-free离心管中，加入50-100μl RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
12. 12000～15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
14. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。注意：测定OD时不要稀释过度，否则浓度会在仪器能测的范围之外。本方法提取的RNA 测OD时一般最多只能稀释10-20倍。
15. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

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