藻类质膜蛋白提取试剂盒

特别提示：包括藻类质膜蛋白提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：藻类质膜蛋白提取试剂盒
英文名称：Algal plasma membrane protein extraction kit
产品货号：HR9065
产品规格：50T|100T

本试剂盒是一种高产质膜蛋白提取试剂盒。藻类质膜蛋白提取试剂盒可以从各种藻类中提取质膜蛋白，包括蓝藻门的原核藻类和各种真核藻类。也可用于纯化蛋白的粗品制备及质膜蛋白制备。提取过程简单方便。

本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞质膜组份，含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。

本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用百奥莱博其他货号的试剂盒（例如货号HR8084）。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（相关产品HR0389）。

我公司可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。可以提供针对不同下游实验应用的试剂盒，例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒；含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒；专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒可供选择。

我公司还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。

试剂盒特点：
1．用方便，从藻类中提取蛋白不需经过超声破碎等前处理。
2．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4．蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

试剂盒组成：
 

组份	50T	100T
组份A：藻类质膜蛋白提取液A	25ml	50ml
组份B：膜蛋白溶解液B	10mL	20mL
组份C：蛋白酶抑制剂混合物C	100μL	200μL

保存条件：2-8℃，有效期一年。

使用注意事项：
1．旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2．实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3．蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
4．蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
5．可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

使用方法：
1．提取液准备：
  每500μL冷的提取液A中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
  ①根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  ②加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
  ③以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
2．取洗净擦干的100-200mg藻类组织样本用手术剪刀尽可能剪碎。
  如果是培养的单细胞藻类，可以洗涤离心后收集沉淀，直接进行下游步骤。
3．加入冷的500μL提取液A，用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
  ①也可以用液氮研磨处理后加入提取液A。
  ②没有液氮研磨条件也可以直接加入冷的提取液A在冰上研磨处理。
4．将匀浆移入另一个预冷的干净离心管中在2-8℃条件下振荡1-2小时。
  ①此步骤必须2-8℃条件下进行。
  ②使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
  ③如果没有2-8℃持续振荡条件，也可直接置2-8℃冰箱静置1-2小时，中间每隔10分钟涡旋振荡混匀。
5．将提取液在2-8℃低温下12000g离心5分钟，取上清。
6．在37℃水浴10分钟。
7．在37℃，1000g离心3分钟。
  ①此步骤必须37℃条件下离心。
  ②如果离心机不可控温，可以不离心，延长上一步骤水浴时间，至溶液分层清晰即可。或者在室温条件下离心，缩短离心时间至1分钟。
8．此时溶液分为两层，小心移除上层，留下管底部下层大约30-50μL液体。
  ①下层为粘稠状液体。
  ②含色素的样本下层蛋白为黄绿色。通常不影响下游应用。
9．用50-150μL冷的膜蛋白溶解液B溶解下层溶液，即得质膜蛋白样品。
10．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  ①建议用BCA法进行蛋白定量。
  ②蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

常见问题分析：
1．蛋白浓度低？
  质膜蛋白丰度较低，需要尽可能加大细胞上样量。处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2．用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3．提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

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