特别提示:包括ROX染料II,50×在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:ROX染料II,50×
产品货号:BTN100931
产品规格:40μL
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名称:taq酶抗体
货号:BTN130815
规格:500U
Taq Antibody是Hot Start PCR用抗Taq抗体,其与Taq酶结合后抑制DNA聚合酶活性。使用本制品进行PCR扩增时,高温变性前抗Taq抗体与Taq酶结合抑制DNA聚合酶活性,能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。抗Taq抗体在PCR反应最初的DNA变性步骤中变性,DNA聚合酶活性恢复,达到Hot Start PCR效果。使用本制品无需特殊的抗Taq抗体失活处理,可以在常规PCR反应条件下使用。其工作原理如下:
储存条件:低温运输,-20℃保存、有效期一年。
活性定义:Taq Antibody与Taq DNA Polymerase混合,25℃,10 min温浴后,在55℃,10 min条件下抑制90%以上的1U的Taq DNA Polymerase活性的Taq Antibody量定义为1U。
纯度:
1. 10 U的Taq Antibody和1μg的λDNA-Hind III在37℃或70℃下反应1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
2. 10 U的Taq Antibody和1μg的Supercoiled pBR322 DNA在37℃或70℃下反应1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
3. 10 U的Taq Antibody和1μg的λDNA在37℃或70℃下反应1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
4. 10 U的Taq Antibody和1μg的16S,23S rRNA在37℃或70℃下反应1小时,RNA的电泳谱带不发生变化。
5. 35Cycles的PCR反应条件下,无Mouse Genomic DNA的污染。
名称:高效热启动DNA聚合酶
货号:WE0123
规格:500U|2500U
本产品是一种采用最新封闭技术的Taq DNA Polymerase,适用于HotStart PCR。在70℃以下,酶的活性中心被完全封闭,有效抑制了聚合酶活性,并能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。在95℃条件下孵育5分钟后,酶的部分活性得以释放。随着热循环的不断进行,剩余的酶活会源源不断地释放出来,这就使得此酶克服了常规Taq酶容易出现平台期的弊端,其扩增效率大大提高。
本品进行PCR扩增时,PCR产物3"末端附有一个“A”碱基,可直接用于T/A克隆。本产品具有扩增速度快、特异性好、稳定性好的特点,主要应用于对扩增产物要求量大的PCR和RT-PCR反应。
产品组成:
组份 |
500U |
2500U |
SuperStar DNA Polymerase,5 U/μl |
100μl |
5×100μl |
10×PCR Buffer |
1.8ml |
5×1.8ml |
注意:本产品的10×PCR Buffer中含有15 mM镁离子。
活性定义:用活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板/引物,在74℃,30分钟内,将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。
质量控制:
1、经过多次柱纯化,SDS-PAGE检测其纯度大于99%;
2、经检测无外源核酸酶活性;
3、PCR方法检测无宿主残余DNA;
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因。
使用方法:
以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
试剂 |
50μl反应体系 |
终浓度 |
10×PCR Buffer |
5μl |
1× |
dNTP Mix,10 mM each |
1μl |
200μM each |
Forward Primer,10μM |
2μl |
0.4μM |
Reverse Primer,10μM |
2μl |
0.4μM |
Template DNA |
<0.5μg |
<0.5μg/50 μ l |
SuperStar DNA Polymerase,5 U/μl |
0.5μl |
2.5 U/50μl |
ddH2O |
up to 50μl |
|
注意: 可以在室温下配制反应液,最好将试剂置于冰上。引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
预变性 |
95℃ |
5 min |
|
变性 |
94℃ |
0.5-1 min |
25-35个循环 |
退火 |
50-68℃ |
0.5-1 min |
延伸 |
72℃ |
1 min |
终延伸 |
72℃ |
10 min |
|
注意:
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,本产品中所包含的SuperStar DNA Polymerase的延伸速率为1 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
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