鼠尾直接PCR扩增试剂盒

特别提示：包括鼠尾直接PCR扩增试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：鼠尾直接PCR扩增试剂盒
英文名称：Mouse Tail Direct PCR Kit
产品货号：ALH205
产品规格：100T|500T

本试剂盒采用独特的裂解缓冲液快速裂解鼠尾，释放的DNA无需纯化便可以作为模板，用高度耐抑制物的2×DirectAmp PCR Mix扩增，扩增产物可直接上样电泳。具有简单，高通量筛选等特点，一般扩增大小<2.5kb。

适用范围：鼠尾、动物组织（哺乳动物，海洋动物，昆虫等）、细胞等。

试剂盒组成：
 

组分	100T	500T
Buffer AD1	0.75ml	3.75ml
Buffer AD2	7.5ml	37.5ml
2×DirectAmp PCR Mix	1ml	5ml
ddH2O(PCR级)	10ml	50ml

保存条件：2×DirectAmp PCR Mix -20℃保存，避免反复冻融次数过多，3周内短时间使用可放4℃保存。其余常温或者4℃保存，有效期12个月。

操作步骤：
1．配制即用裂解液：按照10μl Buffer AD1 + 90μl ddH2O = 100μl比例混合配制成即用裂解液。每个样品需要75μl即用裂解液，具体量可以根据样品数量按照比例放大配制即可。即用裂解液可常温存放1个月。
2．取75μl裂解液于0.2mL PCR薄壁管中（没有PCR仪器者也可以用0.5ml离心管）。然后加入1-2mm的鼠尾或者2mm见方的组织（切记不可多加，多加反而抑制下游PCR），样品浸没在裂解液内。
3．98℃裂解30min（建议PCR仪上操作），根据情况裂解时间可以在10分钟-1小时内调整。
4．取出离心管迅速放冰上，加入75μl Buffer AD2，混匀，即可直接用做PCR模板或置于4℃或-20℃保存。
5．PCR扩增：
建议PCR条件(以20μl反应体系为例)
 

成分	用量	终浓度
裂解混合物模板	1-2μl	as required
2×DirectAmp PCR Mix	10μl	1×
Forward Primer(10μM)	0.4μl	0.2μM each
Reverse Primer(10μM)	0.4μl	0.2μM each
补ddH2O至	20μl	-

PCR循环：
 

温度	时间	循环数
95℃	5min	1
94℃	30sec	35-40
54～60℃	30sec
72℃	1kb/min
72℃	5～10min	1

注意事项：
1．如果扩增条带较弱，可以适当增加或者减少模板加入量，裂解混合物模板一般可以在1μl-4μl内调节。
2．如果非特异扩增较多，可调整退火温度，或者适当增减模板用量。
3．各溶液使用完毕后，应该立刻盖紧盖子，以免PH改变影响质量。

根据您的关注的鼠尾直接PCR扩增试剂盒，高温等温扩增DNA解旋酶，您可能还对以下产品有需求：

 

货号	名称	规格
BTN70905	2%明胶溶液(PCR级)	1.5mL
WE0155	BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶)(低含量ROX校正染料)	5ml
WE0159	dNTP混合溶液(10 mM)	1ml|5ml
SY0030	长片段DNA聚合酶	125U
SY0045	dNTP套装(100mM each)	4×400μl
JN0053	一步法RT-qPCR试剂盒(荧光探针)	100次

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名称：25mM氯化锰溶液(PCR级MnCl2溶液)
货号：BTN130307
规格：5mL
本产品为专门用于易错PCR的MnCl2水溶液，浓度为25mM，可用于调节MnCl2的最佳浓度。由于Mg2+在PCR过程中可以稳定非互补的碱基对，Mn2+能够降低聚合酶对模板的特异性，因而调整两种离子的浓度，可获得不同突变频率的多样性文库。

氯化锰分子量为125.8，CAS号为7773-01-5，水合氯化锰外观为玫瑰色单斜晶体；无水氯化锰外观为桃红色结晶。密度为2.977g/cm3。熔点是650℃。在高于熔点温度下升华。沸点1190℃。易溶于水，溶于醇，不溶于醚。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

名称：taq酶抗体
货号：BTN130815
规格：500U
Taq Antibody是Hot Start PCR用抗Taq抗体，其与Taq酶结合后抑制DNA聚合酶活性。使用本制品进行PCR扩增时，高温变性前抗Taq抗体与Taq酶结合抑制DNA聚合酶活性，能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。抗Taq抗体在PCR反应最初的DNA变性步骤中变性，DNA聚合酶活性恢复，达到Hot Start PCR效果。使用本制品无需特殊的抗Taq抗体失活处理，可以在常规PCR反应条件下使用。其工作原理如下：


储存条件：低温运输，-20℃保存、有效期一年。

活性定义：Taq Antibody与Taq DNA Polymerase混合，25℃，10 min温浴后，在55℃，10 min条件下抑制90％以上的1U的Taq DNA Polymerase活性的Taq Antibody量定义为1U。

纯度：
1. 10 U的Taq Antibody和1μg的λDNA-Hind III在37℃或70℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
2. 10 U的Taq Antibody和1μg的Supercoiled pBR322 DNA在37℃或70℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
3. 10 U的Taq Antibody和1μg的λDNA在37℃或70℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
4. 10 U的Taq Antibody和1μg的16S，23S rRNA在37℃或70℃下反应1小时，RNA的电泳谱带不发生变化。
5. 35Cycles的PCR反应条件下，无Mouse Genomic DNA的污染。

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