免疫染色强力通透液

特别提示：包括免疫染色强力通透液在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：免疫染色强力通透液
英文名称：Enhanced Immunostaining Permeabilization Solution
产品货号：YT997
产品规格：100mL|500mL

本制品可以用于免疫染色等多种原位检测时细胞样品、冰冻或石蜡切片的通透处理，有助于暴露抗原、核酸等作用靶点，使抗体、探针或标记物等更容易进入细胞内，从而确保并增强染色等的检测效果。本产品为即用型工作液，可以直接使用，无需稀释。

本产品通透能力强，推荐用于各种常规的免疫荧光、免疫组化、免疫细胞化学、流式检测、细胞凋亡的TUNEL检测，特别适合需要强力通透细胞膜的情况。

通透液通常可以通过使用有机溶剂例如甲醇、丙酮等，或者使用去垢剂例如Triton X-100、Saponin等来实现对于细胞膜的通透。甲醇或丙酮等有机溶剂，一方面可以溶解细胞膜和核膜从而充分暴露细胞浆和细胞核中的目的蛋白等，另一方面也可以使细胞内的蛋白变性起到固定的作用。甲醇或丙酮等有机试剂操作比较简单，一步处理可以同时实现固定和通透，缺点是膜蛋白也会被溶解掉并且有些蛋白变性后不利于后续的检测，因此有机溶剂使用相对较少，仅用于一些要求比较粗糙的检测。Triton X-100是常用的通透试剂，可以通透细胞膜和核膜，作用的原理也是非特异性地溶解细胞膜，因此其缺点是不利于膜蛋白的检测，但当使用进行交联和固定后，相当一部分膜蛋白会被交联固定，从而不会被Triton X-100溶解，因此后续仍然能检测到。
Saponin可以特异性地溶解细胞膜中的胆固醇，从而实现在细胞膜上选择性地打孔，其优点是适合于细胞膜蛋白的检测，特别适合通过流式细胞仪检测细胞膜上的标志性蛋白，缺点是对于一些胆固醇含量低的细胞通透效果差，通透效果弱于Triton X-100和有机溶剂，并且不能通透胆固醇含量很低的核膜和线粒体膜。对于凝集素(lectin)的检测，含Triton X-100等非特异性去垢剂的通透液的效果显著优于主要含Saponin的通透液。

本免疫染色强力通透液中含有Triton X-100等去垢剂，配制在PBS中。经本免疫染色强力通透液处理的样品，对于细胞浆或细胞核内目的蛋白的免疫染色检测结果表明，染色效果与常规的通透液相比基本一致或有显著增强。

按照每个样品需要0.1或1毫升免疫染色强力通透液计算，一个100ml包装的本产品可以通透1000个或100个样品，一个500ml包装的本产品可以通透5000个或500个样品。

保存条件：4℃保存，一年有效。-20℃可以长期保存，室温保存一个月内有效。

根据您的关注的免疫染色强力通透液，您可能还对以下产品有需求：



名称：Alexa Fluor 555抗小鼠免疫荧光染色试剂盒
货号：YT113
规格：>300次
本试剂盒含有Alexa Fluor 555标记的驴抗小鼠IgG(H+L)抗体，可以用于检测小鼠来源的相应一抗，观察到的颜色为非常鲜艳的红色。Alexa Fluor 555是一种常用的非常明亮的红色荧光探针。它比绝大部分常用的红色荧光探针更加明亮，更加不容易淬灭，而且背景更低。Alexa Fluor 555的荧光光谱和Cy3非常接近。Alexa Fluor 555的吸收峰555nm、发射峰565nm。本试剂盒提供了含有荧光标记抗体稳定剂的免疫荧光染色二抗稀释液，可以确保荧光标记抗体稀释后在4℃可以保存长达6个月，并且在6个月内至少可以重复使用10次。本试剂盒含有抗荧光淬灭封片液，可以使荧光更加持久。本试剂盒对于六孔板内的细胞样品或常规切片，至少可以检测300个样品。

试剂盒组份：
抗小鼠Alexa Fluor 555 —————30μl
免疫荧光染色二抗稀释液—————50ml
抗荧光淬灭封片液————————15ml

注意事项：
1. 需荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
2. 在使用抗荧光淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光，特别是需要尽量缩短在荧光显微镜下的观察时间。
3. 荧光物质均易发生淬灭，染色后宜尽快进行荧光显微镜下的观察。如果不能及时观察可以4℃避光保存，但存放时间通常不宜超过一周，随着存放时间的延长可能会导致观察效果越来越差。
4. 免疫荧光染色效果的好坏和一抗的关系非常密切。建议选购有较多文献报道的并注明可以用于免疫荧光染色的一抗用于本实验。
5. 如果观察时发现荧光过弱，可以适当提高一抗的浓度；如果荧光还是比较弱，可以适当提高荧光标记抗体的浓度。

储存条件：-20℃，有效期一年。

名称：BCA蛋白浓度测定试剂盒
货号：ZN1871
规格：250次/500次/2500次
主要成份：
A 液 50ml
B 液 2.5ml
蛋白标准品 10ml(2mg/ml)
产品描述：应用试管法可以测量 25 管，微孔板法可以测量 250 孔。
产品保存：室温保存，一年内有效。
产品说明：碱性条件下，蛋白将 Cu2+还原为Cu+,Cu+与 BCA 试剂形成紫颜色的络合物，吸光度强度与蛋白浓度成正比。测定其在 562nm 处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
1.准确灵敏，线性范围广，BCA 试剂的蛋白质测定范围是 20－2000μg/ml。
2.快速：45分钟内完成测定。
3.经济实用：在微孔板中进行测定，可大大节约样品和试剂用量。
4.不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。
5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
注意事项：
1.低温或长期保存，若发现 BCA 试剂 A或者试剂 B 有沉淀发生。请 37ºC 温育并伴随搅拌促使其充分溶解。如发现细菌污染，则应丢弃，避免对实验结果造成影响。
2．不受大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中 5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20，60，80 等。(详情见附录)
3 每次测量蛋白浓度均应做标准曲线。
4.当试剂 A和 B 混合时会有浑浊，混匀后就会消失。
5.需准备 37℃水浴或温箱、酶标仪或普通分光光度计，测定波长为540-595nm 之间，562nm 最佳。酶标仪需与 96 孔酶标板配套使用。使用分光光度计测定蛋白浓度时，试剂盒测定的样品数量会因此而减少。使用温箱孵育时，应注意防止因水分蒸发影响检测结果。
6.使用 BCA 蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，因此需注意保持定时和定温，以确保精确定量。
7.实验操作规范，提高上样量的精确度。
使用方法：
一．配制 BSA 标准品
注：标准品稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS 进行稀释。
二.配制 BCA 工作液
A.计算所需要的总 BCA 工作液体积。
总 BCA 工作液体积=(标准品+待测样品)×重复数×每个样品所需要的BCA 工作液
注意：试管法检测时每个样品加 2.0ml BCA 工作液，微孔板检测每个样品加 200μl BCA 工作液。
B.配制 BCA 工作液：50 体积的BCA 试剂 A 中加入 1 体积的BCA 试剂 B(A:B=50:1)，充分混匀。
注意：BCA 试剂 B 加入 BCA 试剂 A 中后，迅速浑浊，通过混匀后立即变澄清。BCA 工作液装入密封容器内，室温条件 24h 稳定。
三.试管法(样品：BCA 工作液=1:20)
1.各取 100μl 标准品和待测样品加入到反应管中。
2.每管加入 2.0ml BCA 工作液，混匀。37℃孵育30min。
注意：也可室温孵育2h，或者 60℃孵育30min。BCA 检测蛋白浓度，延长孵育时间会加深颜色反应。升高温度会加快显色反应。但是温度升高和时间延长会降低检测下限，以及降低工作线性范围
3.冷却到室温。在分光光度计上进行检测，设定波长为562nm。用装满水的比色皿对仪器校零。然后在 10分钟内对所有样品读数。
注意：由于 BCA 反应达不到真正的反应终点，即使温度降低至室温生色反应液会继续。但是，由于室温下生色比率相当低，因此若是 10min 内能对所有的样本进行 562nm 吸光度的测试，不会导致明显错误。
4.根据 BSA 标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD 值即最终的读数)，绘制标准曲线(X-蛋白浓度 μg/ml；
Y-最终的OD562nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
四.微孔板法(样品：BCA 工作液=1:8)
1.各取 25μl 标准品和待测样品加入到微孔板中。
注意：样品与工作液比例为1:8，若样品有限，可使用 10μl 标准品和待检测样品进行检测(即 1:20)，这时试剂盒的检测范围为125-2000μg/ml。
2.每孔加入 200μl BCA 工作液，振荡 30s 充分混匀。盖上微孔板，37℃孵育30min。
3.冷却到室温，在酶标仪上的540～595nm 波长范围处检测吸光度，其中 562nm 波长为最佳。
注意：延长孵育时间或者提高样品：BCA 工作比会增高每个孔的OD562nm 净值，并且降低检测下限和工作线性范围。
4.根据 BSA 标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD 值即最终的读数)，绘制标准曲线(X-蛋白浓度 μg/ml；
Y-最终的OD562nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度

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货号	名称	规格
YT068	Western洗涤液(WB洗涤液)	250ml
YT077	TMB显色液(组化或膜HRP显色用)	100ml
YT081	EDTA抗原修复液(50X)	100ml
YT111	AMCA抗小鼠免疫荧光染色试剂盒	>300次
YT875	封闭液(用TBS配置，含吐温20)	100ml
ZN1869	4%溶液(含DEPC)	500ml
ZN1873	BSA标准品	20ml

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