T4 UvsY蛋白 T4 UvsY Protein 同样来源于T4噬菌体,属于ABC家族ATP酶,具有典型的两亚基结构,包含ATP结合位点和相互作用位点。T4 UvsY蛋白是RPA技术中另一关键酶,它与T4 UvsX Recombinase共同发挥作用。T4 UvsY蛋白可与T4 UvsX Recombinase形成异四聚物复合体,促进T4 UvsX Recombinase与单链DNA的相互作用。T4 UvsY蛋白可增强T4 UvsX Recombinase与DNA的结合,促进其替换过程,并协助其进入细胞核内。
T4 UvsY蛋白由E.coli表达的重组蛋白,是将蛋白基因接入稳定表达载体,经克隆筛选,质量验证,挑选的稳定表达株,由化学成分确定的培养基(不含有任何动物源成分)发酵制备,工艺稳定,保证了产品质量及批次间的一致性。
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规格参数:
货号:EH03601
规格:100ug/500ug/1mg/10mg
为工业客户提供g级。
质量控制:
纯 度:
经高效液相色谱(SEC-HPLC)和SDS-PAGE检测,纯度大于95%.
使用说明:
长期储存于-80℃,首次使用后保存于-20℃,避免反复冻融。
工作机理:
T4 UvsY蛋白在RPA反应中的主要作用是:
(1) 促进T4 UvsX Recombinase与单链DNA的结合
T4 UvsY蛋白与T4 UvsX Recombinase形成复合体,并且促进后者与单链DNA的结合,从而增强单链DNA的稳定性。
(2) 加速T4 UvsX Recombinase的替换
当引物退火并开始进行聚合酶延伸时,T4 UvsY蛋白可加速T4 UvsX Recombinase从单链DNA上的替换,使核酸模板完全暴露,有利于延伸反应的进行。
(3) 促进细胞内导入
T4 UvsY蛋白还可协助T4 UvsX Recombinase进入细胞核内,这有利于将RPA技术应用于检测细胞核内的DNA及RNA。
作用机制:
T4 UvsY蛋白主要通过三种机制促进T4 UvsX Recombinase的功能。
(1) 蛋白间相互作用
T4 UvsY蛋白可直接与T4 UvsX Recombinase形成稳定的蛋白复合体,促进其结合和释放DNA的动力学过程。
(2) ATP酶活性
T4 UvsY蛋白本身具有ATP酶活性,可加速T4 UvsX Recombinasemediated DNA结合和解离所需的ATP水解过程。
(3) DNA依赖性ATPase活性
T4 UvsY蛋白与DNA-T4 UvsX Recombinase复合体结合后,其ATP酶活性显著增加,这加速了T4 UvsX Recombinase的替换过程。
T4 UvsY蛋白是RPA技术中发挥关键作用的一种ATP酶,其主要应用如下:
1. 提高RPA反应效率
T4 UvsY蛋白可增强T4 UvsX Recombinase与单链DNA的结合,促进其替换过程,这可提高RPA反应的效率和灵敏度,实现更高效的等温扩增。
2. 商业RPA试剂盒
许多商业RPA试剂盒中的重组酶成分除T4 UvsX Recombinase外,还包含T4 UvsY蛋白,如TwistDx的Recombinase Polymerase Amplification kit等。这些试剂盒的性能优于仅含T4 UvsX Recombinase的试剂盒。
3. 检测低丰度靶核酸
由于T4 UvsY蛋白的作用,RPA技术的检测灵敏度显著提高,可实现更低丰度的DNA/RNA的检测,满足某些样本极低浓度下的检测需求。
4. 实现细胞核内检测
T4 UvsY蛋白还可协助T4 UvsX Recombinase进入细胞核内,这使RPA技术可实现对细胞核内DNA和RNA的检测,满足相关研究与诊断的需求。
5. 病原体低丰度检测
联合使用与特定病原体高度同源的引物,T4 UvsY蛋白及RPA技术可实现病原体极低丰度的快速检测,应用于某些病原体感染的诊断,特别是病毒感染的诊断。
6. 微生物快速检测
设计与特定微生物同源的引物,联合T4 UvsY蛋白及RPA技术,可实现相关微生物DNA/RNA的快速检测,满足微生物检测与鉴定的需求,应用于环境监测、食品安全等领域。
7. miRNA表达检测
利用与特定miRNA同源的引物,联合T4 UvsY蛋白及RPA技术,可灵敏度检测细胞内miRNA的表达,实现miRNA功能研究与miRNA作为生物标记物的开发等。
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相关RPA原料:
EH03201 Bst DNA聚合酶 Bst DNA polymerase
EH04801 核酸外切酶 IV Exonuclease IV
EH04701 核酸外切酶 III Exonuclease III
EH02501 M-MuLV反转录酶 M-MuLV Reverse Transcriptase
EH03301 Bsu DNA聚合酶大片段 Bsu DNA polymerase, Large Fragment
EH04501 重组肌酸激酶(CK) Creatine Kinase
EH03501 T4 UvsX重组酶 T4 UvsX Recombinase
EH03401 T4噬菌体基因32编码蛋白(gp 32) T4 gene 32 Protein