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预期用途/摘要
大/小鼠I型胶原C端肽酶联免疫试剂盒用于定量检测大/小鼠血清或尿,以及体外细胞培养上清液中
由大/小鼠破骨细胞释放的骨相关的I型胶原C端肽降解产物。本试剂盒仅用于科研。
生理学
I 型胶原占骨有机基质90%以上,主要在骨中合成。骨骼更新时,I型胶原被降解,短肽片段进入血液。可以通过在骨切片或牙质片层上培养骨细胞的方式对骨重吸收过程进行体外研究。在破骨细胞进行骨重吸收过程中,Ⅰ型胶原C端肽会降解成片段而被释放。基于上述观察,RatLaps™ EIA可测定大/小鼠血清、尿和骨细胞培养上清液中的I型胶原C端肽降解产物。
应用
评估啮齿动物骨吸收
大/小鼠卵巢切除术模型
大鼠甲状腺/甲状旁腺切除术模型
大/小鼠骨转移模型
基因敲除和转基因小鼠对骨吸收的影响
评估组织培养骨吸收
大/小鼠的颅骨、胫骨或跖骨
大/小鼠I型胶原C端肽试剂盒用于啮齿动物骨吸收的定量评估。试剂盒可检测大/小鼠尿,血清和细胞培养上
清液里破骨细胞骨吸收过程中产生的I型胶原C端肽片段。
CIC-7抑制剂防止骨吸收而不影响骨形成
昼夜变化是所有骨吸收标志物的一个典型特征
昼夜变化比其他来源的变化对骨转换标志物的影响更大
收集时间需一致
禁食6小时后收集样本。早上开始禁食午餐后采集样本。
试剂盒信息
货号: AC-06F1
预期用途: 仅用于科研
规格: 96孔
方法学: 竞争性酶联免疫法
每个试剂盒的检测人份: 40人份(双孔)
标准品: 6个
质控品: 1个
样本类型: 血清,血浆,尿,
细胞培养上清液
样本容积: 20μL
样本提取物: 无
最小检测浓度: 2.0ng/mL
可反应种物种: 大鼠、小鼠、豚鼠
检测范围: 0-200ng/mL
精确度:
批内差: <10%
批间差: <15%
总检测时间: 过夜
手工处理时间: 60分钟
数据处理: 4参数曲线拟合
样本采集
请注意:我们强烈建议骨疾病体内模型采用血清样本用于研究,因为这样减少了变化可得到最佳结果。然而,这个过程也可采用尿液样本。
重要事项:须采集空腹样本。
建议禁食至少6小时后采集大/小鼠空腹尿或血清样本,比如下午。
血清:需空腹收集大/小鼠血清样本。建议鼠血清样本置于-20℃或以下保存。样本置于-20℃可稳定保存18个月。
尿液:可现场采集尿样或利用代谢笼等类似装置收集24小时内的尿样。建议鼠尿样本置于2-8℃保存不应超过1周,但长期保存应置于-20℃或以下。在评估结果前尿液样本需进行肌酐校正。
培养液:收集大/小鼠骨片或牙质片层上培养的骨细胞上清液。当天收集当天检测,置于-20℃或以下可长期保存。
样本保存条件和时间
血浆/血清 尿液
室温 4小时 8小时
4-8℃ 无数据 2天
-20℃ <18个月 >24个月
参考值
建议实验室建立自己的正常值和病理值的范围。3月龄SPRD雌性大鼠的平均值,平均标准差和标准误差举例如下。
预期血清值(雌性) mean±SD
3月龄SPRD 38.8±6.6ng/ml
6月龄SPRD 26.9±7.0ng/ml
实验举例
3月龄雌性大鼠(Sprague-Dawley)随机分成三组:(1)假手术组(n=10),(2)卵巢切除术组(OVX)(n=10),(3)卵巢切除后皮下植17b-雌二醇小球组(0.5mg,相当于8mg/天)(OVX+EE)(n=10)。
所有血清样本在禁食(不提供任何食物和水)6小时后采集。早晨7:00开始禁食,下午13.00收集样本。
实验前的第0天第一次抽取血样,采用RatLaps™ 酶免试剂盒检测I型胶原片段(CTX),Rat-MID™中段骨钙素酶免试剂盒检测中段骨钙素(21-29)。所有检测结果用基线测定值的百分数(%)表示。图上的误差条为SEM。
RatLaps™ 酶免试剂盒可快速检测到卵巢切除术后骨吸收增加。手术后两周内,RatLaps水平升高至手术前的186%。而骨吸收的增加可通过使用雌二醇抑制。同样,Rat-MID™中段骨钙素酶免试剂盒可检测到卵巢切除术引起的骨形成增加。手术后两周内,Rat-MID水平升高至手术前的146%。而骨形成的增加亦可以通过使用雌二醇抑制。
结论:血清RatLaps™和Rat-MID™测定可用于检测大鼠卵巢切除术诱发的骨吸收和骨形成方面的变化。
试剂盒特点
易于操作
样本量仅20μL
尿和血清样本都可测定
所有试剂可直接使用
过夜孵育
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