TALEN基因敲除大鼠的定制化服务

TALEN技术制备基因敲除大鼠

制备流程

1、TALEN的构建

TALEN由四部分组成：N端序列，RVDs，C端序列，FokI。利用Type II限制性内切酶可以将RVD模块分别生成不同的粘性末端，同时又不留有酶切位点，通过GoldenGate反应实现RVDs与TALEN骨架的无缝连接。

2、TALEN的蛋白质表达鉴定

TALEN构建成功后，将其质粒转染大鼠细胞系后，提取总蛋白，进行SDS-PAGE电泳，利用标签抗体进行western blotting检测其表达。

3、TALEN的体外活性检测

1）套峰检测

TALEN质粒转染大鼠细胞系，1~2天后提取细胞基因组DNA，PCR扩增靶位点序列，进行DNA测序，通过spacer区域出现套峰情况评价TALEN的活性。

2）错配酶检测

将靶序列PCR扩增子进行变性-退火，进行错配酶（MSDase）反应，将MSDase的消化产物进行电泳，通过比较切割条带与非切割条带的比例，即可反映出TALEN的活性高低。

4、受精卵注射及基因敲除大鼠的基因型鉴定

利用体外转录试剂盒将有活性的TALEN分别体外转录为mRNA后进行受精卵注射。将打靶的胚胎移植到代孕母鼠的输卵管，经过21-23天的孕育后F0代基因敲除大鼠出生，并进行基因型鉴定。

大鼠的优势：

A、在一些疾病模型方面，大鼠模型也更有优势，如人心血管疾病、糖尿病、神经性疾病（行为干预和成瘾）、神经元再生、移植、自体免疫紊乱（风湿性关节炎）、癌症、创伤和骨愈合等疾病；
B、大鼠体内的解毒酶系统与人体内的更相似，利用大鼠模型进行临床前期药物的药效和毒理检测将比小鼠模型更加准确；
C、大鼠的体形比较大，更易于仪器检测及采血、神经传导实验和手术操作等，有利于进行药效学评价和安全检测。

百奥赛图是一家创新技术驱动新药研发的国际性生物技术公司，致力于成为全球新药发源地，以专注技术创新、持续新药产出、守护人类健康为使命。基于百奥赛图自主研发并拥有完全独立知识产权的全人抗体RenMab^®、RenLite^®、RenNano^®小鼠，将单细胞抗体发现技术平台、高效的基因编辑模型开发平台、规模化动物模型供应平台、快速的动物体内外药效评价平台、强大的临床开发能力有机整合在一起，形成了独具特色、涵盖药物研发全流程的新药研发体系。公司成功战略升级为Biotech，未来将更聚焦于创新抗体药物研发。随着规模化抗体药物研发-“千鼠万抗^TM”计划的实施，百奥赛图将携手全球合作伙伴，共同加速新药研发。百奥赛图总部位于北京，在江苏海门、美国波士顿、上海等地设有分支机构，全资子公司祐和医药专注于临床开发。

公司充分利用其快速整合中美两国优势资源的能力，建立起由“独特的基因打靶载体构建技术”、“传代稳定的C57BL/6遗传背景的小鼠胚胎干细胞”、“精确的显微注射系统”组成的基因敲除小鼠开发与服务平台, 和以CRISPR/Cas9/TALEN技术为核心组建的基因敲除/基因嵌入模式动物开发与服务平台。截止2014年底，以两大平台为依托，已经和正在开发基因敲除/基因敲入小鼠近600种，基因敲除/敲进大鼠50余种，基因敲除/敲进细胞系40余种，灵长类动物4种（与科研院所合作）、斑马鱼5种，成为国际上基因敲除/嵌入模式动物开发最具实力公司之一。
 

公司凭借其独特的技术开发平台、规范的技术操作系统、严格的质量评价体系以及一支开发经验丰富、专业知识互补、执行力强的骨干人才队伍，在成立五年多的时间里，已经建立起国内外广泛的技术服务网络。服务群体不仅包括以哈佛大学，NIH, 东京大学，牛津大学，北京大学，清华大学，中科院动物所，中科院神经所等为代表的国内外科研学术机构，也包括以协和医院、北大医院等为代表的科研实力强大的综合性医院，更包括以强生、罗氏、GSK、默克等为代表的国际顶尖医药企业。