试剂盒介绍
大肠杆菌经Ca离子处理后可摄取外源DNA(Plasmid、Phage DNA),处于这种状态的细胞称作感受态细胞(Competent Cells)。
该感受态细胞用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性,PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。使用pUC19质粒检测,转化效率可达107。
使用方法
(1) 将100μl感受态细胞于冰上解冻。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
(2) 取5μl连接产物加入到感受态细胞中,轻轻旋转几次以混匀内容物。在冰上放置30分钟。
(3) 将管放入预加温到42℃的水浴中,热激90秒。快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却2~3分钟。该过程不要摇动离心管。
(4) 每管中加900μl LB(SOC)培养基(不含抗生素),37℃振荡培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
(5) 室温4,000rpm离心5分钟,弃去900μl上清后,用剩余100μl培养基重悬细胞并涂布到LB琼脂平板表面。
(6) 将平板置于室温直至液体被吸收。
(7) 倒置平皿,于37℃培养,12~16小时后可出现菌落。
储存条件
-70℃冻存
基因型
F- ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3) pLysS(cmR)
注意事项
(1) 感受态应保存在-70℃,不可多次冻融和放置时间过长,运输过程中应放入干冰中。
(2) 实验操作过程应严格无菌,防止其他DNA的污染,以免为以后的筛选、鉴定带来影响。
试剂盒内容
组 成
|
KT1002-01
|
KT1002-02
|
感受态细胞
|
10×100μl
|
20×100μl
|
pUC57
(0.1ng/μl)
|
10μl
|
10μl
|
bio-equip.com
华因康基因(集团)成立于2008年,由入选中组部首批“千人计划”的国家海外高层次人才、国家特聘专家团队创立。集团秉承“专业、严谨、创新、服务”的经营理念,致力于中华民族健康事业,成为以基因技术为核心,拥有雄厚技术支撑,具备研发、生产和应用完整产业链的生命科技领域国家级高新技术企业集团。
公司的宗旨:探索基因信息,提高生命价值,并致力培养一批生命科学领域以基因生物研究为基础的研发和应用的尖端人才;不断创新核心产品,促进基因生物产业化的快速发展。
公司的核心技术:涉及生物物理、生物化学、生物信息、电子工程、表面化学、光学工程和五金机械等专业理论。目前已申请100多项外发明专利,35项计算机软件著作权,37个商标。已完成高通量基因测序仪企业标准在国家标准委备案,同时也完成基因测序系统科技成果鉴定,其产品未来具有广泛的市场前景。
公司成立以来,在国家有关部委、中科院、广东省和深圳市政府及有关高校、科研机构的热情关注和大力支持下,公司荣获“广东省重点引进海外创新科研团队”、深圳市南山区“创业之星”大赛冠军、国务院侨办“重点华人华侨企业创业团队”等十多项荣誉称号,公司也是广东省科技部教育部产学研重点示范基地,国家“博士后工作站”,两名博士入选首批国家引进海外高层次人才“千人计划”,得到了国家领导人的亲切关怀和鼓励,公司核心产品高通量基因测序仪也于2010年被认定为国家重点新产品。
公司秉承“探索基因信息,提高生命价值”的理念,以中华民族健康事业为己任,与国内顶级医院及科研机构携手,开拓高通量基因测序技术在生命科学与健康医疗领域中的广阔应用,为人类的健康事业提供专业、贴心的个性化服务。
作为生物技术战略新兴产业,我们将依靠科学、脚踏实地、再接再厉,不断创造新的业绩。