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Rosetta(DE3)感受态细胞
英文名称:Rosetta(DE3) Competent Cells总访问:6726
国产/进口:国产半年访问:19
产地/品牌:深圳产品类别:细胞株/菌种
规       格:KT1003 最后更新:2013-7-5
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 试剂盒介绍

大肠杆菌经Ca离子处理后可摄取外源DNA(Plasmid、Phage DNA),处于这种状态的细胞称作感受态细胞(Competent Cells)。
该感受态细胞用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。该菌株是携带氯霉素抗性质粒BL21的衍生菌,补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA,CCC, GGA)对应的tRNA,提高外源基因、尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。使用pUC57 质粒检测,转化效率可达107
使用方法
(1) 将100μl感受态细胞于冰上解冻。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
(2) 取5μl连接产物加入到感受态细胞中,轻轻旋转几次以混匀内容物。在冰上放置30分钟。
(3) 将管放入预加温到42℃的水浴中,热激90秒。快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却2~3分钟。该过程不要摇动离心管。
(4) 每管中加900μl LB(SOC)培养基(不含抗生素),37℃振荡培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
(5)  室温4,000rpm离心5分钟,弃去900μl上清后,用剩余100μl培养基重悬细胞并涂布到LB琼脂平板表面。
(6) 将平板置于室温直至液体被吸收。
(7) 倒置平皿,于37℃培养,12~16小时后可出现菌落。
 
储存条件
-70℃冻存
 
基因型
F-ompT hsdSB(rB- mB-) gal dcm lacY1 (DE3) pRARE (argU, argW, ileX, glyT, leuW, proL) (CmR)
 
 
试剂盒内容
 
组 成
KT1003-01
KT1003-02
感受态细胞
10×100μl
20×100μl
pUC57
(0.1ng/μl)
10μl
10μl
 
 
 
 
 
 
 
注意事项
(1) 感受态应保存在-70℃,不可多次冻融和放置时间过长,运输过程中应放入干冰中。
(2) 实验操作过程应严格无菌,防止其他DNA的污染,以免为以后的筛选、鉴定带来影响。

 

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