HiMedia M543 叶酸酪蛋白测定培养基

品名：HiMedia M543 叶酸酪蛋白测定培养基
英文：Folic Acid Casei Medium
货号：M543
品牌：HiMedia
用途：叶酸的微生物法测定
原理　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　
HiMedia叶酸酪蛋白测定培养基（又名叶酸干酪培养基）采用鼠李糖乳杆菌（ATCC 7469）为测定用菌，用于叶酸的微生物法测定。该培养基是基于Flynn等人(1)的配方，并经Baker等人(2)和Waters、Mollin(3)改良。用于维生素测定的培养基通常需要三种：维持培养基、接种培养基和测定用培养基。后者通常是化学限定的培养基，包含所有测定菌生长所需的养分，但不含有待测的分子。类似的，叶酸干酪培养基包含鼠李糖乳杆菌生长所需的所有成分，但不包含叶酸。因而，添加一系列浓度增加的叶酸，会观察到鼠李糖乳杆菌生长的递增。
鼠李糖乳杆菌（ATCC 7469）的贮备菌制备是在AOAC推荐的乳杆菌琼脂（货号M366）试管穿刺接种培养，35-37°C孵育18-24小时后，试管储存在冰箱里。每月转接一次。测定菌液的制备是将贮备菌转种到含10ml微量维生素检测接种肉汤（货号M133）或乳酸杆菌肉汤（货号M367）的试管中。35-37°C孵育24小时后，在无菌条件下菌液离心，弃掉上清，再重悬于10ml的无菌叶酸干酪培养基中（货号M543）。再像之前一样沉淀，并清洗一次。清洗后的菌株重悬于10ml叶酸干酪培养基中，并用该培养基进行1:100稀释。1滴重悬液用于接种到每个测定管中。也可用0.85% NaCl代替培养基来清洗和稀释。
由于灭菌条件，孵育温度等因素会影响标准曲线读数，并且每次不会完全一样，因此每次都应制备标准曲线。10ml管内的标准品量为0,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1ng。
叶酸标准品的制备：将20mg叶酸干粉溶于含有20ml乙醇的100ml蒸馏水中。用0.1N NaOH调整溶液pH值为10.0，再用0.05N HCl调pH为 7.0。该溶液含有200mg叶酸/ml。用999ml蒸馏水稀释1ml该溶液，则浓度为200ng/ml。再用999ml叶酸缓冲液A（货号M544）稀释1ml该溶液，则为0.2ng/ml的叶酸标准溶液。每管取0,0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0和5ml该溶液，配置即告完成。
样本叶酸浓度的测定步骤：如前所述使用0.5,1.0,1.5ml或其他体积的制备好的血清提取物。加入5ml叶酸干酪培养基和足量的蒸馏水，使每个试管的总体积为10ml。15磅121°C灭菌5分钟。冷却试管并向每个试管中加入一滴接种液。35-37℃孵育18-24小时后进行浊度读数。读数前将试管冷藏15-30分钟以停止细菌生长。620nm检测吸光度。待测样品中的叶酸含量应根据标准曲线来确定，不过要考虑样品稀释度。
应非常小心，避免培养基和玻璃器具被污染。应使用洁净的无去污剂的玻璃器具。少量的外源物质的污染可能导致错误的结果。
 
应用　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　
叶酸干酪培养基用于叶酸的微生物法测定。鼠李糖乳杆菌（ATCC 7469）为测定用菌。
培养基配方 （克/升）
 
无维生素酸水解酪蛋白10.000
葡萄糖40.000
醋酸钠40.000
磷酸氢二钾1.000
磷酸二氢钾1.000
DL-色氨酸0.200
天门冬酰胺0.600
抗坏血酸4.000
L-胱氨酸盐酸盐0.500
硫酸腺嘌呤0.010
尿嘧啶0.010
黄嘌呤0.020
脱水山梨糖醇单油酸酯络合物0.100
还原型谷胱甘肽0.005
硫酸镁0.400
氯化钠0.020
硫酸亚铁0.020
硫酸锰0.015
核黄素（维生素B2）0.001
对氨基苯甲酸（PABA）0.002
盐酸吡哆醇0.004
盐酸硫胺素0.0004
泛酸钙0.0008
烟酸0.0008
生物素0.00002
最终pH值 (25°C)   6.7±0.1
 
质量控制　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　
Ÿ外观——米黄色至黄色均一自由流动粉末
Ÿ制备好的培养基颜色和透明度——淡琥珀色透明溶液，可能有轻微沉淀
Ÿ配比浓度——在25°C下9.4%w/v(8.5g/100ml水）水溶液，pH值为6.7±0.1
ŸpH值——6.60-6.80
配置　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　
称取9.4g干粉培养基溶于100ml蒸馏水，加入50mg抗坏血酸。加热至沸腾使培养基完全溶解。测定时，分装至每管为5ml培养基（包含标准品和待测样品）。加蒸馏水，使总体积达到10ml。高压消毒15磅121°C 5分钟。立即冷却。
培养反应　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　
采用鼠李糖乳杆菌（ATCC 7469）进行叶酸的微生物法测定。35-37°C孵育16-18小时。
生长状况　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　
可获得良好的生长。随着测定管叶酸标准品浓度升高（即 0, 0.1,0.2, 0.4, 0.6, 0.8,1ng），鼠李糖乳杆菌生长逐渐递增，伴随着620nm处吸光度的增加。
常备现货品种：
M036 B12 测定用培养基    100g/瓶
M040 烟酸测定用培养基 100g/瓶
M126 叶酸培养基，AOAC 100g/瓶
M1281 泛酸测定用培养基，AOAC 100g/瓶
M543 叶酸酪蛋白培养基 100g/瓶
M185 B12 培养琼脂 100g/瓶
M206 B12 接种肉汤 100g/瓶
M366 乳酸菌琼脂 100g/瓶
M367 乳酸菌肉汤 100g/瓶
M641 乳酸菌MRS琼脂 100g/瓶

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