全内反射萤光显微镜

TIRF Microscope全内反射萤光显微镜

　　TIRF为加强显微萤光影像轴向解析度之一种光学技术，此技术最适用于观察贴近盖玻片表面区域之萤光样本，如观察细胞膜相关之生理作用，及活体外单分子交互作用之研究等。由于此类样本所需观察的z轴范围仅约100 nm厚，易受离盖玻片表面较远区域所产生之萤光讯号干扰，影响观察范围的影像清晰度。



　　TIRF Microscope乃利用物理光学之全内反射原理，使用可调整入射角度之雷射光源，配合高数值孔径值之物镜，使激光由物镜入射至样本时，在盖玻片与样本介质(主要为水溶液)之交界面，产生光学全内反射现象。此现象使光线不至于穿透交界面而激发整体样本，只有距盖玻片表面厚度不到200 nm的范围内之区域为受激发范围，且受激强度随着与盖玻片表面之距离呈等比级数下降。因受激发的范围大量减少，此技术可避免非焦面之样本产生发散萤光，故能解决非焦面萤光杂光之问题，达到光学切片之清晰化效果。
　　TIRF技术之研发由来已久，早在1981即有第一篇相关论文发表。经多年发展，在激光光路设计丶激光角度调整丶物镜N.A.值丶适用之浸油及盖玻片等各方面均不断改良。Carl Zeiss亦于今年年初推出创新研发设计的TIRF Microscope，包含以下配件∶

多波长(458, 488, 514 nm)Argon激光∶
　Argon激光由光纤管导引至TIRF Slider，使用者亦可自备其他波长之激光器。
TIRF Slider∶
　创新之TIRF光路设计，将激光由显微镜侧方之萤光视野光圈位置导入，避免传统由显微镜后方之萤光光源位置导入所产生的诸多操作及调整不便问题。其特殊之Polar Cube设计，可允许100%激光反射及50%传统萤光穿透，切换两种光源只需切按Shutter，完全不需调整其他Filter Wheel，操作快速便利且易学。

特别设计的α Plan-Fluar 100X/1.45物镜∶
　超高N.A.提供足够之入射角达到全内反射的效果，且不需使用具毒性之浸油及昂贵的sapphire盖玻片。 这一点是更加重要。

激光保护装置∶
　独创设计，电动式激光shutter联控，避免使用者在任何可能状态下直视激光光源，提供使用者一个安全免受激光伤害之操作环境。
Zeiss TIRF solution可装置于Zeiss全新研究级倒立萤光显微镜Axiovert 200，旧有机身亦可改装升级。其应用范围如下∶
Cell Biology (Cell Physiology / Neurobiology / Neurophysiology):
　Membrane surfaces: interaction cell surface – environment
Exocytosis- Endocytosis
Cell-substrate-contacts, transmembrane ion currents
Localisation and trafficking of membrane associated molecules
Membrane penetration of virus particles into the cell
　 Docking of vesicles to cell membrane
Proteines into the cell membrane
　 Interaction of the cytoskeleton with cell membrane
Molecular Biology / Developmental Biology / Biochemistry
　 Single molecule , i.e. Myosin-ATP interaction, proteine-membrane interaction
　 Protein-protein-interactions, gene expression analysis
　 Protein-trafficking。




 

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专注实验成像十五年
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样品制备：石蜡切片、冰冻切片、 超薄切片以及相关制样设备
样品观察：品牌显微镜 、品牌CCD 、  sCMOS相机 、EMCCD 、    小动物成像
图像处理：显微镜系统整合改造 、多维度图像工作站 、多光谱全景组织成像工作站 、             全玻片扫描及分析工作站
系统：激光共聚焦 、双光子生理显微镜 、转盘式共聚焦 、 超高分辨率显微镜（SIM/STED/STORM) 、Lightsheet光片显微镜 、高内涵显微系统、激光显微切割系统
 
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