| 产品及特点 |
本产品专门从各种软骨组织样品中快速纯化总RNA的试剂盒，它能有效克服传统TRIzol方法提取软骨组织RNA时，十分容易产生糖蛋白和酸性多糖污染这一缺点。本产品具有下列特点：
- 能有效去除糖蛋白、粘蛋白污染。
- OD260/280一般均在1.9以上。
- RNA产率一般为5-15 ug/100 mg。
- 操作简单，整个提取过程一般只需要10多分钟。
- 得到的RNA可以直接用于RT-PCR、Northern杂交、mRNA纯化、Primer Extension、RNA Protection、in vitro translation等研究。
- 本产品只能用于科研。
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| 规格及成分 |
本产品使用大扁盒包装
| 成 份 |
编 号 |
规格 |
包装 |
| 软骨RNA纯化溶液A |
211231a |
50 mL |
60mL本色瓶 |
| 软骨RNA纯化溶液B |
211231b |
15 mL |
15mL棕色玻璃瓶 |
| 软骨RNA纯化溶液C |
211231c |
50 mL |
60mL本色瓶 |
| 离心吸附柱 |
220144 |
50套 |
塑料袋 |
| 通用洗柱液 |
220143 |
50 mL |
60mL本色瓶 |
| RNA洗脱液 |
971207 |
10 mL |
10mL本色瓶 |
| 使用手册 |
211231sc |
1份 |
无 |
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| 运输及保存 |
常温运输和保存，有效期一年。软骨RNA纯化溶液B 4℃保存。 |
| 自备试剂 |
氯仿。 |
| 使用方法 |
- 先将50-200 mg新鲜或冷冻的软骨组织在研钵中液氮研磨成粉，加入到装有1 mL软骨RNA纯化溶液A的1.5mL离心管中（软骨RNA纯化溶液A低温放置会产生沉淀，如果有沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并摇晃混匀），振荡混合30秒。也可以将软骨组织剪碎后与软骨RNA纯化溶液A在10-15mL塑料管中用Polytron匀浆机(内切式匀浆机)匀浆5-20秒，再转移到1.5 mL离心管中。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。
- 在离心管中加入0.3 mL的软骨RNA纯化溶液B和0.2 mL自备氯仿，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
- 室温12000-15000 g离心3-5分钟，两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。
- 将上清液(约0.6 mL)转移到另一干净的1.5 mL塑料离心管中，下层紫色有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100 uL上清液不取。
- 加入等体积的软骨RNA纯化溶液C，充分颠倒混匀。
- 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12000-15000 g室温离心半分钟，弃穿透液。
- 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中， 12000-15000 g室温离心半分钟，弃穿透液。
- 加0.7 mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。
- 加0.3 mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。
- 室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
- 将离心吸附柱转移到自备的RNase-free离心管中，加入50uL RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
- 12000-15000 g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
- RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子（BioTechniques，28：414，2000）。
- RNA产量产率测定：可以用Nanodrop测RNA的浓度。如果用常规分光光度计，则将5μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。注意：测定OD时不要稀释过度，否则浓度会在仪器能测的范围之外。本方法提取的RNA测OD时一般最多只能稀释10-20倍。
- RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。
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