人端粒长度检测试剂盒(染料法qPCR相对定量)

名称：人端粒长度检测试剂盒（染料法qPCR相对定量）
编号：230431
规格：50次
目录价3995元

产品及特点	端粒是指真核细胞染色体末端独特的蛋白质-DNA结构, 人类端粒由 TTAGGG重复串联构成, 长度为 5～15Kb。端粒对于染色体的稳定非常重要, 其主要通过防止染色体降解及端端融合来维护染色体的稳定和功能。因为线形染色体的末端复制问题, 细胞每次分裂, 端粒可减少20～200bp, 直到达到关键长度, 此时细胞步入老化阶段。因此, 外周血白细胞的端粒长度与年龄呈负相关，快速检测端粒长度具有重要的意义。本试剂盒根据染料法荧光定量PCR原理，在同一反应中同时检测端粒和一个单拷贝基因，根据两个扩增产生的荧光信号的比值来确定端粒的相对长度，其原理示意图如下：   它具有下列特点： 即开即用，用户只需要提供外周血DNA模板。 操作只需要半天，比Southern杂交检测法快3-5天时间。 端粒和内参的检测在一管内完成，误差小。 使用PCR扩增，几乎每个分子生物学实验都有相关设备，非常方便。 本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。。 本产品只能用于科研。
规格及成分	本产品采用十孔盒包装 成分 编号 规格 包装 2×Probe qPCR MasterMix 981201 0.5 mL 0.5mL本色盖 荧光PCR专用模板稀释液 180701 1 mL 1.5mL绿盖管 超纯水 210806 1 mL 1.5mL蓝盖管 人端粒和内参引物干粉 yw230431 50次 0.5mL棕色管 使用手册 15-230431sc 1份 无 注意:引物干粉在首次使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入 162uL 的超纯 水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。
运输及保存	低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂	样品DNA。
使用方法	一、待测样品DNA的制备 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。用自选方法纯化样品的DNA。用PicoGreen法或NanoDrop仪器对回收的DNA进行纯度测定和定量。纯度必须达到OD260=1.7-1.9。然后统一稀释到50ng/uL，每次PCR用3uL。 二、稀释标准曲线样品 如果有N个样品，任选一个样本来稀释，作为标准品。 标记5个离心管，分别标注为1-5号，分别对应模板浓度25 ng/uL、12.5 ng/uL、6.3 ng/uL、3.2 ng/uL、1.6 ng/uL、0.8 ng/uL。 用带芯枪头分别加入50 μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头（下同）。 在1号管中加入50 μL 50ng/uL的阳性对照(第7步制备的N个样本中任选一个)，充分震荡1分钟，得1号标准曲线样品。放冰上待用。 换枪头，在2号管中加入1号标准曲线样品 (上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得2号标准曲线样品。放冰上待用。 换枪头，在3号管中加入2号标准曲线样品(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得3号标准曲线样品。放冰上待用。 重复上面的操作直到得到5个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。 三、SYBR qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行） 强烈建议每个样本做3次重复，N样本则需要做3N+5+1个PCR反应，多出的5个是用于标准曲线样本，另外一个是无模板阴性对照。按下表加入各成分： 成分 样品管 3N个管 标准曲线 样本5个 阴性对照 2×Probe qPCR MasterMix 各10 μL 各10 μL 10 μL 端粒和内参引物混合液 各3 μL 各3 μL 3 μL 待测DNA样本 各3 μL 不加 不加 标准曲线稀释液 （1-5号） 不加 各3μL 不加 补超纯水 到20 μL 到20 μL 到20 μL     盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR： 过程 温度 时间 第1步 95℃ 15分钟 第2步 2次循环 94℃ 15秒 49℃ 15秒 第3步 32次循环 94℃ 15秒 62℃ 10秒 74℃ 15秒，采集端粒扩增荧光信号 80℃ 10秒 88℃ 15秒，采集内参扩增荧光信号 第4步   熔解曲线分析 四、数据分析 熔解曲线分析：熔解曲线分析用于判断扩增是否有效。如果得到Tm分别为78℃（端粒PCR产物）和91℃（内参PCR产物）的两个峰，则表示实验有效，可以进入下一步分析。如果没有同时得到这两个峰，则表示扩增为非特异性扩增，实验无效，不需要分析Ct数据，需要找到原因后再继续实验。 制作标准曲线：以标准曲线样本浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制两条标准曲线，一条是用端粒的Ct值绘制，另外一条用内参的Ct值绘制。 确定待测样本浓度：通过标准曲线的公式，通过待测样本的端粒Ct和内参Ct，分别计算出样本中端粒的浓度和内参的浓度（ng数），再计算T/S值（即端粒浓度/内参浓度）。由于有三次重复，最后通过三个比值计算出每个样本T/S的平均值。
关联产品	人端粒酶活性检测试剂盒（qPCR法）

北京天净沙目前拥有5万多种自产科研试剂产品，包括2万多种PCR和LAMP检测产品（包括动物病原、植物病原、GMO转基因、种源性、中药材真伪、抗药性、SNP）、数千种即用型溶液，数千种即用型DMSZ和ATCC培养基、数千种酶活性和代谢物检测产品（酶法）、数千种质粒和菌种、数千种分子生物学试剂、数千种组织化学和免疫组化产品等。
了解详细产品信息请登录www.tjs.bio，有意合作请联系13552364306微信同号

北京天净沙基因科技有限公司目前拥有5万多种自产科研试剂产品，包括2万多种PCR和LAMP检测产品（包括动物病原、植物病原、GMO转基因、种源性、中药材真伪、抗药性、SNP）、数千种即用型溶液，数千种即用型DMSZ和ATCC培养基、数千种酶活性和代谢物检测产品（酶法）、数千种质粒和菌种、数千种分子生物学试剂、数千种组织化学和免疫组化产品等。
公司网站：www.tjs.bio
联系电话： 13552364773 微信同号 
销售客服1QQ：2911288001
销售客服2QQ：1920078524