BT-549_人乳腺癌细胞

BT-549_人乳腺癌细胞
产品信息
细胞名称：BT-549_ 人乳腺癌细胞
种属来源:  人
性别年龄： 女性
种属来源:  乳腺
生长特性： 贴壁生长
细胞形态:  上皮细胞样
细胞规格:  1 X 10⁶cells/T25或1 mL冻存管
培养条件:  RPMI 1640+10% fetal bovine serum
37 ℃, 5% CO2
冻存条件:  90% FBS + 10% DMSO
传代方法：1:3传代, 2-3天传1代
细胞培养操作
干冰运输：收到细胞后需立即转入液氮保存、或者-80°C冰箱短期冻存、或者直接复苏
常温运输：收到细胞后，请立即将细胞培养瓶从包装盒中取出，并按照下方操作步骤进行培养传代
细胞传代：细胞密度达80% - 90%，即可进行传代培养
 
培养瓶中细胞操作步骤
 对于贴壁培养的细胞，寄送前，我们会将培养基充满整个培养瓶，以减少产品运输过程中贴壁细胞的脱落。

1. 收到细胞后，请注意观察是否有污染。将培养瓶置于倒置显微镜下仔细检查是否浑浊、是否细菌污染。因为运输过程中存在颠簸，且有些细胞对温度变化也很敏感，可能存在一些细胞脱落漂浮的情况，这些细胞仍是活细胞，请勿丢弃，可离心富集后传代使用。
2. 对于贴壁细胞，在生物安全柜环境中，用真空泵去除培养瓶中多余的培养基，至剩余5-8mL 左右，随后根据培养基选择合适的CO2含量的37℃恒温培养箱中培养，拧松瓶盖。如果细胞已经长满培养瓶，请立即传代。
3. 对于悬浮的细胞，在生物安全柜环境中，转移培养瓶中的细胞至离心管，150 g 离心 5 分钟，去除上清后，用5 mL培养基吹散细胞，转移至新的培养瓶中，随后置于合适的CO2含量的37℃恒温培养箱中培养。

 
冻存管细胞操作步骤
注意： 为保证细胞的高活率，请收到产品后，立即解冻培养。

1. 将冻存管置于37℃水浴中来回晃动，迅速解冻。为避免污染，确保冻存管口置于水面之上。解冻需迅速，大约1分钟。
2. 一旦冻存管中液体融化后，立即取出，采用酒精喷拭冻存管表面。从此步开始，后续操作须在生物安全柜中完成。
3. 将冻存管中的液体转移到含有5mL完全培养基的离心管中，150 g 离心 5 分钟，用真空泵去除上清。
4. 用完全培养基重新悬浮细胞并转移到新的培养瓶中。为保证细胞复苏的存活率，请将培养基在37℃水浴预热后使用。
5. 将细胞置于含有合适CO2的37℃恒温培养箱中培养。

 
贴壁细胞传代培养

1. 吸取并弃掉培养瓶中培养基，加入PBS润洗一次。
2. 加入1 mL 0.25 (w/v) Trypsin-EDTA 溶液，并置于37℃培养箱中孵育，直至细胞从壁上脱落分离。此过程大约需要3-5分钟。
3. 加入2mL完全培养基中和胰蛋白酶，并轻轻吹打将细胞从培养瓶表面吹落，并使细胞分散。
4. 将细胞悬液收集到15mL离心管里，150 g 离心 5 分钟，用真空泵去除上清。取适量的培养基将细胞重悬，转移到新的培养瓶中培养。

悬浮细胞传代可参考以下方法：
 一、直接传代法
    1、待悬浮细胞长满至 80%～90%（细胞悬液变黄），即可传代；
    2、用吸管吸弃细胞悬液 1 / 2~1 / 3；
    3、加入适量的新鲜培养基，继续培养。
 二、离心传代法（在发现有细胞碎片的情况下）
    1、将细胞悬液转移到离心管内；
    2、150 g 离心 5 min，弃去上层清液；
    3、使用新鲜的培养基重悬细胞；
    4、吸管吸取适量细胞悬液，装入新的培养瓶，再加入适量的新鲜培养基，继续培养。
 
细胞冻存操作
1. 1000rpm离心5分钟去掉上清。加1 mL血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，    DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1 x 10⁶/mL，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
2. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80°C冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。
 

上海格宁生物科技有限公司成立于2020年10月，经营范围为生物科技领域内的技术开发、技术咨询、技术转让和技术服务。主要从事新药研发领域的重组细胞系构建和细胞生化水平的药物样品活性测试。上海格宁生物科技有限公司开发了1000种以上各类重组细胞系，靶点涉及G蛋白偶联受体、离子通道、核受体、信号通路等。利用这些稳定表达功能型细胞系，公司将构建广泛的药物筛选平台，一方面对外出售功能验证的细胞产品，一方面为国内外医药企业提供研发外包服务，以人类健康为使命，助力合作伙伴的科研进程。