本产品是一款以磁珠为纯化介质的外泌体 microRNA 提取试剂盒,专门用于提取外泌体中的 microRNA,用于反转录、Northern Blot 或测序等生物学实验。
1. 简单、快速提取外泌体溶液中的 microRNA。 2. 磁珠可以有效吸附 microRNA,提高 microRNA 产量和纯度。 3. DNA 去除柱可有效去除外泌体中的 DNA,提高 microRNA 的纯度。
1. 试剂配制。在 Wash Buffer D(漂洗液)中加入 21 mL 无水乙醇,混匀,制备漂洗液。 2. 外泌体裂解。按照外泌体溶液:miRNA 裂解液(Lysis Buffer for microRNA)=1:3 的比例,在 1 mL 外泌体溶液中加入 3 mL 裂解液(Lysis Buffer for miRNA),混匀,室温静置 3-5 min。 3. 将混合液体转移至 DNA 去除柱内,12, 000 g,4 ℃离心 2 min,保留滤液,弃 DNA 去除柱。 4. 向滤液中加入等体积的异丙醇(4 ml,使异丙醇的终浓度达到 50%以上),颠倒混匀。 5. 加入 50 μL 磁珠(吸取磁珠前先震荡混匀),置于静音混合器中 4 ℃旋转孵育 30 min。 6. 取出离心管,置于磁力架上,使磁珠聚集;或置于离心机中,3, 000 g,4 ℃离心 2 min,沉淀磁 珠。弃上清。 7. 加入 0.5-1 ml Wash Buffer C(去蛋白液),轻微震荡(Vortex,1,000 rpm)30 sec,洗涤磁珠, 离心法或磁力法沉淀磁珠,弃上清。 8. 加入 0.5-1 ml Wash Buffer D(漂洗液,注意是否加入乙醇), 轻微震荡(Vortex,1,000 rpm)30 sec,洗涤磁珠,离心法或磁力法沉淀磁珠,弃上清。 9. 3, 000 g,4 ℃离心 2 min,沉淀磁珠,用移液枪移除残液。 10. 加入 100 μL Elution Buffer R 或 RNase-free ddH2O,震荡(Vortex,2,000 rpm),30 sec,洗脱 RNA。 11. 置于磁力架上使磁珠聚集,或 7, 000 g,4 ℃离心 2 min,沉淀磁珠。转移上清液至新的 EP 管中, 即为 microRNA 溶液。 12. 测定 microRNA 浓度与纯度,用于反转录或其它实验,或保存于-80 ℃冰箱。
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北京奥秘佳得医药科技有限公司是一家生物医药高新技术企业,具有先进的药物研发平台和锐意创新的技术团队,主要致力于生物和化学高新药物的研发与生产。同时,凭借完善的生物实验平台和专业的技术团队。目前,公司在细胞外囊泡研究领域取得了显著成果,研发了以磁珠为分离介质的外泌体纯化试剂盒和慢病毒纯化试剂盒,建立了一套高效的外泌体和慢病毒纯化技术,为二者的大规模分离纯化及临床研究提供了有效地技术保障