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在基于Fox的羟基自由基蛋白足迹(HRPF)中,蛋白质与H202和腺嘌呤预先混合,并通过通过熔融石英毛细管泵送样品引入光解模块中。腺嘌呤作为一种内标,其光度吸光度的变化反映了有效的•OH产率。
在光解模块上,光照射产生攻击蛋白质和腺嘌呤的•OH。样品继续向上流动并进入自由基剂量计的检测区域,在那里测量紫外线吸光度的变化。在贴标过程中,剂量学模块评估有效的•OH负荷,使用户能够根据背景清除的变化调整闪光强度。这种独特的实时反馈循环大大提高了标记的可重复性,为差异研究提供了信心。在产品收集器处,标记的蛋白质最终沉积在含有过氧化氢酶和蛋氨酸淬火溶液的微管中。
Fox蛋白足迹系统可以轻松执行所有基于HRPF的HOS研究,这些研究以前需要复杂,昂贵和危险的激光或光束线源。
研究人员已经使用HRPF成功地:
检测蛋白质HOS和功能缺陷,
暴露单克隆抗体 (mAb) 的产生问题,
展示单克隆抗体 HOS 与药物功能的相互作用,
说明创新产品的生物仿制药故障和存储引起的缺陷,
表征膜蛋白靶标,
确定配体复合时的蛋白质构象变化和结合Kd,
促进异体肌的研究,以及实现细胞蛋白和整个生物体的体内标记。