一、普通cDNA文库构建
1. 服务流程
1.1 客户样品QC,Total RNA的提取、mRNA的分离、cDNA双链的合成。
1.2 对合成的cDNA双链进行长度筛选。
1.3 将长度筛选的cDNA与载体进行连接反应。
1.4 将连接产物电转化感受态细胞。
1.5 cDNA文库的QC,检测文库库容量以及每个文库随机挑取32个克隆子,PCR检测检测平均插入片段大小,阳性率。
2.产品内容
2.1 我们提供构建好的cDNA文库的甘油菌液(含20%甘油的LB培养基),随机克隆子的PCR鉴定图谱,文库构建报告。
3.质量标准
3.1 文库库容量:大于1*10^7 CFU。
3.2 平均插入片段:大于1.2Kbp。
3.3 阳性率:大于95%
4.服务时间
20个工作日内。
二、全长cDNA文库构建
1. 服务流程
1.1 客户样品QC,Total RNA的提取,mRNA的分离。
1.2 采用特殊方法进行全长mRNA的富集,cDNA双链的合成。
1.3 对合成的cDNA双链进行长度筛选。
1.4 将长度筛选的cDNA与载体进行连接反应。
1.5 将连接产物电转化感受态细胞。
1.6 cDNA文库的QC:检测文库库容量;每个文库随机挑取32个克隆子,PCR检测检测平均插入片段大小,阳性率;随机挑取24个克隆进行正向测序,通过NCBI的BLSTAX分析全长率。
2.产品内容
2.1 我们提供构建好的cDNA文库的甘油菌液(含20%甘油的LB培养基),随机克隆子的PCR鉴定图谱,24个克隆正向测序报告,文库构建报告。
3.质量标准
3.1 文库库容量:大于5*10^6 CFU。
3.2 平均插入片段:大于1.2Kbp。
3.3 阳性率:大于95%。
3.4 全长率:大于65%。
4.服务时间
25个工作日内
三、高全长比例全长cDNA文库构建
1. 服务流程
1.1 客户样品QC,Total RNA的提取,mRNA的分离。
1.2 采用特殊方法进行全长mRNA的富集,cDNA双链的合成。
1.3 对合成的cDNA双链进行长度筛选。
1.4 将长度筛选的cDNA与载体进行连接反应。
1.5 将连接产物电转化感受态细胞。
1.6 cDNA文库的QC:检测文库库容量;每个文库随机挑取32个克隆子,PCR检测检测平均插入片段大小,阳性率;随机挑取24个克隆进行正向测序,通过NCBI的BLSTAX分析全长率。
2.产品内容
2.1 我们提供构建好的cDNA文库的甘油菌液(含20%甘油的LB培养基),随机克隆子的PCR鉴定图谱,24个克隆正向测序报告,文库构建报告。
3.质量标准
3.1 文库库容量:大于5*10^6 CFU。
3.2 平均插入片段:大于1.2Kbp。
3.3 阳性率:大于95%。
3.4 全长率:大于80%。
4.服务时间
35个工作日内
四、均一化cDNA文库构建
1. 服务流程
1.1 RNA提取,mRNA分离,cDNA合成
1.2 DSN法处理cDNA
1.3 处理后cDNAPCR扩增,连接到载体,电转化。
1.4 均一化cDNA文库的鉴定:检测库容量(总CFU);随机挑取32个克隆子,PCR方法检测平均插入片段大小;qPCR检测均一化前后两个文库中两个看家基因的表达量差异以判断均一化的效果。
2.产品内容
我们提供构建好的cDNA文库的甘油菌液(含20%甘油的LB培养基),随机克隆子的PCR鉴定图谱,文库构建报告。
3.质量标准
3.1 文库库容量:大于5*10^5 CFU。
3.2 平均插入片段:大于1.2Kbp。
3.3 阳性率:大于95%。
3.4 均一化后相对于均一化前看家基因拷贝数降低50倍以上。
4.服务时间
15个工作日内
五、消减cDNA文库构建
1. 服务流程
1.1 样本的QC
1.2 分别抽提Tester和Driver样本的RNA,分离mRNA。
1.3 双链cDNA的合成以及cDNA的酶切
1.4 cDNA杂交
1.5 PCR扩增,连接到T载体,转化。
1.6 消减文库的检测:检测库容量(总CFU);随机挑取32个克隆子,PCR方法检测平均插入片段大小。
2.产品内容
我们提供构建好的cDNA文库的甘油菌液(含20%甘油的LB培养基),PCR产物,随机克隆子的PCR鉴定图谱,文库构建报告。
3.质量标准:阳性率:大于95%。
4.服务时间
30个工作日内
六、酵母双杂交(酵母单杂交)cDNA文库构建
1. 服务流程
1.1 客户样品QC,Total RNA的提取以及mRNA的分离,cDNA双链的合成。
1.2 对合成的cDNA双链进行长度筛选。
1.3 将长度筛选的cDNA与载体进行连接反应,载体可选pGADT7,pGADT7-Rec,pGADT7-Rec2, PCDNA3.1 或者其他任意指定载体,根据客户需求确定载体。
1.4 将连接产物电转化感受态细胞。
1.5 cDNA文库的QC:检测文库库容量;随机挑取32个克隆子,PCR检测平均插入片段大小,阳性率。
2.产品内容
我们提供构建好的酵母文库的甘油菌液(含20%甘油的LB培养基),文库甘油菌,随机克隆子的PCR鉴定图谱,文库构建报告,酵母双杂交筛选相关细胞和质粒。
3.质量标准
3.1 文库库容量:大于1*10^7 CFU。
3.2 平均插入片段:大于1.2Kbp。
3.3 阳性率:大于95%。
4.服务时间
30个工作日内
七、构建到PET28、pCDNA3.1、PET22等各种载体的表达文库构建
1. 服务流程
1.1 客户样品QC,Total RNA的提取以及mRNA的分离,cDNA双链的合成。
1.2 对合成的cDNA双链进行长度筛选。
1.3 将长度筛选的cDNA与载体进行连接反应,载体可选PET28、pCDNA3.1、PET22或者其他任意指定载体,根据客户需求确定载体。
1.4 将连接产物电转化感受态细胞。
1.5 cDNA文库的QC:检测文库库容量;随机挑取32个克隆子,PCR检测平均插入片段大小,阳性率。
2.产品内容
我们提供构建好的表达文库的甘油菌液(含20%甘油的LB培养基),文库甘油菌,随机克隆子的PCR鉴定图谱,文库构建报告等。
3.质量标准
3.1 文库库容量:大于1*10^7 CFU。
3.2 平均插入片段:大于1.2Kbp。
3.3 阳性率:大于95%。
4.服务时间
30个工作日内
八、Fosmid文库构建
1. 服务流程
1.1 样本的QC
1.2 高质量基因组DNA的提取,基因组DNA的打断处理
1.3 打断后的DNA连接到载体
1.4 连接产物的包装和侵染大肠杆菌细胞
1.5 fosmid文库的检测:检测库容量(总CFU);随机挑取16个克隆子,抽提质粒,酶切检测插入片段大小与阳性率。
2.产品内容
我们提供构建好的fosmid文库的甘油菌液(含20%甘油的LB培养基),随机克隆子的质粒酶切鉴定电泳图,文库构建报告。
3.质量标准
3.1 滴度:大于1*10^5
3.2 阳性率:大于90%。
3.3 平均插入片段:大于35Kbp
4.服务时间
35个工作日内