非预染型可曝光Marker包括6条带,从14KD到150KD,如下图1所示。蛋白Marker中每一条带都能和抗体结合,能识别小鼠,兔,羊IgG(其他物种待测试更新),能精确指示目的条带位置,与一抗,二抗同时孵育即可。此款可曝光marker可搭配预染Marker一起使用。本产品能够应用于化学发光,荧光等检测。
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图1
Marker条带以及各不同分子量分布。
12%分离胶, 5%脱脂奶粉-TBST封闭并稀释一抗,小鼠单抗HSP70(YM3042)4℃孵育过夜,5%脱脂奶粉-TBST稀释二抗,羊抗小鼠IgG(H+L) HRP,ECL发光检测。 |
二、 产品使用说明
1、 低温取出后,室温平衡至完全溶解,混匀即用,无需加热,无需再添加任何试剂。
2、 本产品短时间内可以4℃保存,长时间保存请存放-20℃,有效期1年。
3、 每次电泳Marker上样3-5ul,溴酚蓝跑到凝胶底部结束电泳.
4、 湿转膜或者半干法转膜,确保充分转膜,然后进行后续的封闭,孵育抗体和检测。
5、 实验前请优先进行预实验验证可曝光Marker的使用体积,本产品会因不同抗体来源,抗体浓度以及抗体稀释液而不同。
三、 问题和解决方案
遇到的问题 |
可能引起的原因 |
解决方案 |
条带较强 |
Marker使用量较多 |
降低用量体积 |
5%奶粉封闭并稀释一抗 |
降低Marker使用量或更换BSA作为封闭和抗体稀释液 |
抗体浓度较高 |
进一步稀释一抗 |
条带较弱 |
封闭液和一抗来源 |
适当增加可曝光marker的上样量 |
条带缺失 |
小鼠单抗且3%BSA封闭并稀释一抗 |
更换成5%奶粉封闭、稀释一抗 |
BSA浓度过高 |
BSA浓度不高于3% |
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