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| 销售商： 北京擎科生物科技有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
Trelief TM SoSoo Cloning Kit
【产品简介】TreliefTM SoSoo Cloning Kit采用的是无缝克隆技术，适合任意方法线性化的质粒载体与单个或多个DNA片段实现快速、高效、无缝拼接，且不依赖限制性内切酶位点。可对目标质粒上某个位点或者多个不连续位点同时进行定点突变。
【产品特点】
快速：反应仅需15 min
简单：不受片段酶切位点影响，无需对片段进行酶切
高效：阳性率可达95%以上
无缝：不引入额外序列
【产品组成及保存】
-25℃~-15℃保存1年，避免反复冻融。
| 组分 | 规格（20 次） |
| 2×SoSoo Mix | 100 µL |
| Control Template（10 ng/µL） | 10 µL |
| Control Vector（10 ng/µL）* | 10 µL |
【操作流程】
按照如下体系配制反应液，混匀瞬时离心后上机。50℃，15 min。
| 组分 | 体积 |
| 2×SoSoo Mix | 5 µL |
| 插入片段 1 | X1 µL* |
| ...... | ...... |
| 插入片段 n | Xn µL |
| 线性载体 | Y µL * |
| ddH2O | Up to 10 µL |
pmols=（质量ng×1000）/（片段长度bp×650 daltons）。
公式简化后V载体：V片段=摩尔比×（B载体C片段/B片段C载体）
（V表示体积，B表示片段长度，C表示浓度）
例如：
5 kb线性化载体（20 ng/µL）与2 kb的插入片段（100 ng/µL）以摩尔比1：5连接。载体和片段的体积比计算为：
即V载体：V片段=1/5×(5×100/2×20)=2.5，所以反应体系为
| 组分 | 体积 |
| 2×SoSoo Mix | 5 µL |
| 插入片段 | 1.4 µL |
| 线性载体 | 3.6 µL |
| ddH2O | Up to 10 µL |
【实例分享】
使用TreliefTM SoSoo Cloning Kit（TSV-S1），分别将 1 kb、5 kb 的目的片段插入载体 pcDNA3.1（+）中，结果显示插入成功率均为100%。
【问题讨论】
Q1：SoSoo 无缝克隆试剂盒适用的实验有哪些？
A1：本试剂盒适用于绝大多数常规“酶切 - 连接”方法的克隆实验。除此之外，常规方法难以快速实现的同时串联 5 个片段进入载体，载体改造（载体 MCS、启动子、增强子、筛选标记物等功能元件的改造和替换）、基因多点突变、全基因合成、单链核酸重组、构建基于 CRISPR/Cas9 的多基因敲除 guide RNA（gRNA）表达载体等。
Q2：SoSoo重组克隆反应使用的载体必须线性化吗？线性化方法是什么？
A2：是的，所需载体必须是线性化的。可以通过酶切处理（单酶切或者双酶切）的方式获得，也可以通过反向PCR扩增获得。
SoSoo重组反应不依赖于5'磷酸基团，也无需去磷酸化处理线性化载体，只需要拥有15~25 bp同源序列即可。
注意：酶切制备线性化载体时，推荐使用双酶切方法使载体线性化完全，降低转化背景（假阳性克隆）；若使用单酶切线性化，请适当延长酶切时间以减少环状质粒残留，降低转化背景。反向PCR扩增制备线性载体时，作为扩增模板的环状质粒务必少加，不高于10 ng为佳，或者扩增完成后使用用Dpn I消化模板质粒，防止原始质粒背景导致假阳性。
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