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| 销售商： 北京擎科生物科技有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
T5 Direct PCR kit (Plus)
多种生物样品的直接扩增，高保真度，极速延伸（10 s/kb）
【产品简介】本产品是一款为多种生物样品直接扩增设计的试剂盒，适用于2 kb以内DNA片段的扩增。样品经过简单的裂解处理即可作为PCR扩增模板，无需进行基因组DNA的提取，使用更加简便。产品中所含的T5 PolStar DNA Polymerase，是在具有校正活性的高保真DNA聚合酶基础上改造而来，特殊的DNA-Binding结构Sso7d蛋白结构域的融合使其具有超快的延伸速度，同时基于lacZα法测试，该酶的保真度为野生型Taq DNA聚合酶的20倍。产品中特别添加特异性增强因子SuperPrime，搭配优化的反应缓冲液可减少扩增条件探索，极大地节省时间。
本产品为2×浓度的PCR直扩预混液，已包含合适浓度的Mg2+、DNA聚合酶和dNTPs，使用时只需添加模板和引物，并补水至1×浓度即可进行反应。使用本试剂盒扩增的产物为平末端，纯化后可用于后续克隆（推荐T载体目录号∶TSV-007B）、酶切、测序及文库构建等实验。
【产品特点】
无需提取基因组DNA，操作简便，省时省力；
改造的T5 PoIStar DNA Polymerase，具有极高的抑制物耐受度，保真度为野生型Taq DNA聚合酶的20倍；
快速扩增，延伸速度高达10 s/kb;
适用于多种样品。
【产品应用】
适用于血液、细菌、真菌、动植物组织等样品的直接扩增，可用于基因敲除分析、转基因检测等鉴定型实验，同时适用于对保真性要求较高的基因克隆等实验。
【产品组成及保存】
-25~-15℃保存2年。
| 组分 | 规格 |
| 2×T5 Direct PCR Mix（Plus） | 5×1.0 mL |
| Lysis Buffer A | 1×10 mL |
| Dilution Buffer B | 1×10 mL |
【操作流程】
反应体系
| 50 µL 体系 | |
| 2×T5 Direct PCR kit（Plus） | 25 µL |
| 10 μM Primer F | 2 µL |
| 10 μM Primer R | 2 µL |
| Template DNA | 1~3 µL |
| ddH2O | Up to 50 µL |
反应程序
| 温度 | 时间 | 循环次数 | ||
| 1 | 预变性 | 98 ℃ | 3 min | 1 cycle |
2 |
变性 | 98 ℃ | 10 s | 35~40 cycles |
| 退火 | Tm+3 ℃ | 10 s | ||
| 延伸 | 72 ℃ | 10~30 s/ kb | ||
| 3 | 终延伸 | 72 ℃ | 3~5 min | 1 cycle |
【实例分享】
1. 真菌菌种鉴定（引物 its1、its4），扩增长度 600 bp~800 bp。
2. 细菌菌种鉴定（引物 27F\1492R），扩增长度~1600 bp。
【问题讨论】
Q1：产品中Dilution Buffer B的作用？
A1：Dilution Buffer B可作为稀释液，当裂解时取样量过大、裂解后上清液颜色较深或血液样品浓度较高、PCR无条带、PCR条带弱或电泳出现拖带时，建议使用Dilution Buffer B对裂解后的上清液进行稀释，可减少裂解后上清液中的杂质影响。推荐使用与Lysis Buffer A等体积的Dilution Buffer B进行稀释。
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