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T5 Direct PCR kit(Animal Tissue)
动物组织样品直接扩增，高保真度，极速延伸（10 s/kb）
【产品简介】
本产品是一款专为动物组织、细胞样品直接扩增设计的试剂盒，适用于2 kb以内DNA片段的扩增。样品经过简单的裂解处理即可作为PCR扩增模板，无需进行基因组DNA的提取，使用更加简便。产品中所含的T5 PolStar DNA Polymerase，为针对动物来源模板优化的高保真DNA聚合酶，是在具有校正活性的高保真DNA聚合酶基础上改造而来，特殊的DNA-Binding结构Sso7d蛋白结构域的融合使其具有超快的延伸速度，同时基于lacZα法测试，该酶的保真度为野生型Taq DNA聚合酶的20倍。产品中特别添加特异性增强因子SuperPrime及延伸增强因子Extension Ehancer，搭配优化的反应缓冲液可减少扩增条件探索，极大地节省时间。
本产品为2×浓度的PCR直扩预混液，已包含合适浓度的Mg2+、DNA聚合酶和dNTPs，使用时只需添加模板和引物，并补水至1×浓度即可进行反应。使用本试剂盒扩增的产物为平末端，纯化后可用于后续克隆（推荐T载体目录号∶TSV-007B）、酶切、测序及文库构建等实验。
【产品特点】
无需提取基因组DNA，操作简便，省时省力；
改造的T5 PolStar DNA Polymerase，具有极高的抑制物耐受度，保真度为野生型Taq DNA聚合酶的20倍；
快速扩增，延伸速度高达10 s/kb;
适用于多种动物组织样品。
【产品应用】
适用于动物组织、细胞等样品的直接扩增，可用于动物基因敲除分析、转基因检测等鉴定型实验，同时适用于对保真性要求较高的基因克隆等实验。
【产品组成及保存】
-25~-15℃保存2年。
本产品是一款专为动物组织、细胞样品直接扩增设计的试剂盒，适用于2 kb以内DNA片段的扩增。样品经过简单的裂解处理即可作为PCR扩增模板，无需进行基因组DNA的提取，使用更加简便。产品中所含的T5 PolStar DNA Polymerase，为针对动物来源模板优化的高保真DNA聚合酶，是在具有校正活性的高保真DNA聚合酶基础上改造而来，特殊的DNA-Binding结构Sso7d蛋白结构域的融合使其具有超快的延伸速度，同时基于lacZα法测试，该酶的保真度为野生型Taq DNA聚合酶的20倍。产品中特别添加特异性增强因子SuperPrime及延伸增强因子Extension Ehancer，搭配优化的反应缓冲液可减少扩增条件探索，极大地节省时间。
本产品为2×浓度的PCR直扩预混液，已包含合适浓度的Mg2+、DNA聚合酶和dNTPs，使用时只需添加模板和引物，并补水至1×浓度即可进行反应。使用本试剂盒扩增的产物为平末端，纯化后可用于后续克隆（推荐T载体目录号∶TSV-007B）、酶切、测序及文库构建等实验。
【产品特点】
无需提取基因组DNA，操作简便，省时省力；
改造的T5 PolStar DNA Polymerase，具有极高的抑制物耐受度，保真度为野生型Taq DNA聚合酶的20倍；
快速扩增，延伸速度高达10 s/kb;
适用于多种动物组织样品。
【产品应用】
适用于动物组织、细胞等样品的直接扩增，可用于动物基因敲除分析、转基因检测等鉴定型实验，同时适用于对保真性要求较高的基因克隆等实验。
【产品组成及保存】
-25~-15℃保存2年。
| 组分 | 规格 |
| 2×T5 Direct PCR kit（Animal） | 5×1.0 mL |
| 5×High GC Additive | 2×1.0 mL |
| Lysis Buffer A | 1×10 mL |
| Dilution Buffer B | 1×10 mL |
| Positive Control Primer Mix（SoX21）（10 μM each） | 100 μL |
【操作流程】
反应体系
| 50 µL 体系 | |
| 2×T5 Direct PCR kit（Animal Tissue） | 25 µL |
| 10 μM Primer F | 2 µL |
| 10 μM Primer R | 2 µL |
| Template DNA | 1~3 µL |
| 5×High GC Additive | 10 µL |
| ddH2O | Up to 50 µL |
反应程序
| 温度 | 时间 | 循环次数 | ||
| 1 | 预变性 | 98 ℃ | 3 min | 1 cycle |
2 |
变性 | 98 ℃ | 10 s | 35~40 cycles |
| 退火 | Tm+3 ℃ | 10 s | ||
| 延伸 | 72 ℃ | 10~30 s/kb | ||
| 3 | 终延伸 | 72 ℃ | 3~5 min | 1 cycle |
【实例分享】
分别取家蝇的头部、腿部、腹部、头部组织，使用T5 Direct PCR kit（Animal Tissue）扩增1.7 kb目的片段。
【问题讨论】
Q1：TSE012的适用范围？
A1：TSE012适用于动物组织、细胞等的直接PCR扩增，样品无需提取基因组DNA。各组织推荐使用量如下：鼠尾、鼠尾≤2 mm
鼠趾≤2 mm（小鼠单个趾甲即可）鼠脏器、脑≤2 mm
斑马鱼、线虫、果蝇等昆虫组织≤2 mm 细胞数量≥105个
果蝇、蚊子等昆虫的翅膀、腿、线虫等较小的组织，可适当减少Lysis Buffer A至10~30 µL；昆虫等包被坚硬外骨骼。建议提前破坏外骨骼使裂解效果更佳。
Q2：T5 Direct PCR kit（Animal Tissue）中5×High GC Additive如何使用？
A2：5×High GC Additive用于扩增片段GC含量（＞65%）时添加。High GC Additive用量视体系大小而定，至终浓度1×为宜。请注意，目的片段（Amplicon）中若GC分布不均，即符合GC-rich的序列只在局部出现，而总GC%不高于65%的情况，也应使用GC Buffer。推荐使用Oligo7等软件对目的片段进行碱基分布分析。
GC-rich片段扩增，建议设计引物Tm在65~75℃之间，上下游引物尽量保持一致，延伸时间以30 s/kb设置。优先使用两步法PCR，延伸温度使用68℃。
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