无表面活性剂的总蛋白提取试剂盒

描述：
无表面活性剂动物细胞/组织总蛋白提取试剂盒，由优化细胞裂解液和离心管柱及 2.0ml 接收管组成， 能够快速从动物细胞（昆虫/哺乳动物/其他培养细胞）和组织（无脊椎动物和脊椎动物）中提取总蛋白。蛋白提取缓冲液中不含任何表面活性剂和 EDTA。试剂盒使用离心管柱专利技术，样品量最小可处理 20ul，最大可达 500ul，解决了用户起始原料限制的因素。操作时间小于 5 分钟，产率可到 1-5 mg/ml。

应用：
可应用于蛋白质组学研究(LC/MS), IP, ELISA，2D 分析，等电聚焦，SDS-PAGE，immunoblottings 及其他应用。试剂盒提供了一个非常快速制备高浓度总蛋白的方法。由于蛋白产量高，且低盐浓度，提取出的蛋白无需脱盐和浓缩，即可直接用于下游应用。

缓冲液配方：非公开

试剂盒组分

1. 15ml 缓冲液A
2. 15ml 缓 冲 液 B
3. 50 个离心管柱
4. 50 个收集管
5. 4 根塑料研磨棒

储存：
储存于 4℃


重要产品信息

 无表面活性剂动物细胞/组织总蛋白提取试剂盒可以快速提取总蛋白，因此蛋白酶抑制剂不是必须加入，但是如果下游实验需要较长时间或者蛋白提取后保存较长时间，建议在Buffer A 中添加蛋白酶抑制剂。推荐使用BCA（Pierce）试剂盒用于蛋白浓度测定。研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制剂应在使用前加入 Buffer A 中。

所需附加材料
1XPBS
涡旋震荡仪台式离心机
BCA 蛋白定量试剂盒（Pierce, Cat # :23227）
操作方法：
细胞样品总蛋白提取

1. 非贴壁细胞

1. 蛋白提取前，将Buffer 和离心管柱及接收管套管放在冰上预冷。
2. 低速离心收集细胞，在离心管中加入 1ml 预冷的 PBS,3000rpm 离心 2-3 分钟清洗细胞。吸去上清，剩余与细胞体积相同体积的PBS。涡旋震荡重悬细胞。
3. 加入表格 1 中相应体积的 Buffer A，涡旋震荡 10-20 秒裂解细胞。加入同等体积的 Buffer B 到管中震荡混匀。

请注意：部分未完全裂解的细胞不会影响样品质量。

4. 将裂解的细胞转移到预冷的离心管柱套管中，14000-16000rpm 离心 30 秒-1 分钟取出。弃去离心管柱，将接收管中溶液转移到新的离心管中保存。蛋白提取完成可应用于下游实验。

表格 1，不同细胞体积应加入相应体积裂解液

细胞体积（ul）	缓冲液 A（ul）	缓冲液 B（ul）
5	20	20
10	50	50
20	100	100
30	200	200

﹡ NIH3T3 和 293T 细胞 10ul 体积相当于 1X106 个细胞