KAPA DNA HyperPrep 文库构建试剂盒

   产品简介

KAPA DNA HyperPrep 文库构建试剂盒提供了一种 灵活、操作简化的实验方法，用于从片段化的双链 DNA（dsDNA）开始的快速构建 Illumina 测序文库。 新型化学法和简化的单管工作流程提高了不同类 型和起始量的 DNA 样本中进行文库构建的效率和 一致性。 该工作流程结合了酶促步骤，并采用最少的基于磁 珠的纯化，从而将样本处理和整个文库制备时间缩 短至 2 - 3 小时。该试剂盒包含以下所需的所有酶 和反应缓冲液： 1. 末端修复和加 A 尾，可产生末端经修复的，并 5’- 磷酸化、3’-dA 加尾的 dsDNA 片段； 2. 接头连接，这期间具有 3’-dTMP 端的 dsDNA 接 头与 3’-dA 加尾的分子连接； 3. 文库扩增（可选），采用高保真、低偏差 PCR 扩 增两端携带适当接头序列的文库片段。 该试剂盒为两个文库构建步骤中的每一步提供单 一的浓缩缓冲液和单一的酶的混合物。从而提供了 最佳的产品稳定性、简易度和效率的组合。但不包 括接头以及连接和文库扩增后纯化所需的磁珠。 KAPA 纯化磁珠和 KAPA 接头是单独出售的。 为了使序列的覆盖均一性最大化，将文库扩增偏差 控制到最小是至关重要的。KAPA HiFi DNA 聚合酶 是专为低偏差、高保真度 PCR 设计的，也是 NGS 文库扩增的首选试剂。1,2,3,4 KAPA DNA HyperPrep 文库构建试剂盒包括 KAPA HiFi 热启动高保真酶预 混液（2X），是一种随时可使用的包含了文库扩增 所有组分的 PCR 混合物（不包括引物和模板）。试 剂盒还包括了文库扩增混合引物（10X），是设计用 于两侧含有 P5 和 P7 Illumina 流动槽序列的文库的 高效扩增。没有扩增模块的试剂盒（KK8501、KK8503 和 KK8505）可用于无 PCR 扩增流程。它们还可以 与 KAPA HiFi 实时文库扩增试剂盒（KK2701 和 KK2702）或 KAPA HiFi Uracil+热启动高保真酶预混 液（KK2801 和 KK2802）结合用于扩增亚硫酸氢盐 转化的文库。
 

   产品应用

KAPA DNA HyperPrep文库构建试剂盒非常适用于低通量和高通量NGS文库构建工作流程，这些工作流程需要进行末端修复、加A尾、接头连接和文库扩增（可选）。该试剂盒设计用于从各种类型和起始量（1 ng-1 μg）的DNA样本开始构建文库，兼容复杂的基因组DNA、细胞游离DNA/循环肿瘤DNA和低质量DNA（如FFPE）。对于小基因组、细胞游离DNA/循环肿瘤DNA和较低复杂性的样本（如ChIP DNA）、扩增子或cDNA（用于RNAseq），可以尝试低起始DNA（~100 pg或更多）进行文库构建。

该实验方法是自动化友好的，可以整合到一系列NGS应用的工作流程中，包括：

● 全基因组，鸟枪法测序

● 全外显子或靶向测序，使用Roche SeqCap EZ、Agilent SureSelect、Illumina TruSeq或IDT xGen Lockdown探针，或其他杂交捕获系统

● 染色质免疫共沉淀测序

● RNA-seq（从cDNA开始）

● 甲基化测序（结合KAPA HiFi Uracil+热启动高保真酶预混液进行文库扩增）。
 

   工作流程图