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| 销售商： 北京擎科生物科技有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
Goldenstar™ RT6 cDNA Synthesis Kit Ver.2
55℃反应，获得15kbcDNA，用于qPCR仅需15 min，含DNase
55℃反应，获得15kbcDNA，用于qPCR仅需15 min，含DNase
【产品简介】
专为两步法RT-PCR 第一步cDNA第一链合成研制的试剂盒，包含RNA到cDNA合成所需的所有试剂。可用于后续PCR、杂交、cDNA文库构建、全长cDNA合成等。GoldenstarTM RT6由改造的莫洛尼鼠白血病逆转录酶（M-MLV RTase）经体外大肠杆菌重组表达而来。GoldenstarTM RT6通过删除RNase H活性，有效减少模板RNA 的降解，使其聚合酶活性及持续性大大增强；并通过随机突变筛选出热稳定性强的突变体，使其反应温度提高到55℃，有利于复杂结构RNA结构的逆转录进行。
【产品特点】
RNaseH活性缺失：产量高、产物长
热稳定性强：适合困难模板、二级结构复杂、高GC的RNA模板
良好的进行性：可获得长片段cDNA
快速去除基因组污染：配有gDNA remover
引物选择灵活：GoldenstarTM Oligo( dT)17、GoldenstarTM Radomer Primer、GST
【产品组成及保存】
-25~-15℃保存，有效期一年。
专为两步法RT-PCR 第一步cDNA第一链合成研制的试剂盒，包含RNA到cDNA合成所需的所有试剂。可用于后续PCR、杂交、cDNA文库构建、全长cDNA合成等。GoldenstarTM RT6由改造的莫洛尼鼠白血病逆转录酶（M-MLV RTase）经体外大肠杆菌重组表达而来。GoldenstarTM RT6通过删除RNase H活性，有效减少模板RNA 的降解，使其聚合酶活性及持续性大大增强；并通过随机突变筛选出热稳定性强的突变体，使其反应温度提高到55℃，有利于复杂结构RNA结构的逆转录进行。
【产品特点】
RNaseH活性缺失：产量高、产物长
热稳定性强：适合困难模板、二级结构复杂、高GC的RNA模板
良好的进行性：可获得长片段cDNA
快速去除基因组污染：配有gDNA remover
引物选择灵活：GoldenstarTM Oligo( dT)17、GoldenstarTM Radomer Primer、GST
【产品组成及保存】
-25~-15℃保存，有效期一年。
| 组分 | 规格 | |
| TSK302S(100 次 ) | TSK302M(100 次 ) | |
| GoldenstarTM RT6 (200U/µL) | 30 µL | 100 µL |
| 5×GoldenstarTM Buffer | 150 µL | 500 µL |
| DTT(0.2 M) | 40 µL | 120 µL |
| dNTP Mix(10 mM) | 40 µL | 120 µL |
| gDNA remover | 40 µL | 120 µL |
| 10×gDNA remover Buffer | 40 µL | 120 µL |
| GoldenstarTM Oligo(dT)17(50 μM) | 40 µL | 120 µL |
| GoldenstarTM Randomer(50 μM) | 40 µL | 120 µL |
| RNase-free Water | 1 mL | 1 mL |
【注意事项】
1．实验操作过程中要注意可能引入RNase污染，操作过程尽量在封闭独立区域，远离质粒提取实验台，使用单独的移液器并佩戴口罩和一次性未开封手套。
2．所有试剂应在推荐温度下保存，使用时可提前把GoldenstarTM RT6之外的其他试剂置于冰上充分融化，颠倒混匀后使用。
3．本试剂盒提供的GoldenstarTM Randomer和GoldenstarTM Oligo(dT)17是针对本试剂盒专门优化的引物。优化后的GoldenstarTM Randomer可较好应用于qPCR实验；当进行多个长片段mRNA的逆转录时，使用GoldenstarTM Oligo(dT)17能获得更好地结果，当进行单个长片段的mRNA逆转录时，推荐使用特异性引物，同时用GoldenstarTM Oligo(dT)17作为补偿方案，以防止特异性引物设计时的缺陷。
【操作流程】
1. 去除基因组
在无核酸酶的微量离心管中按如下表格配置反应体系，轻轻混匀后瞬时离心：
| 组分 | 用量 |
| RNA template | * |
| gDNA remover | 1 µL |
| 10×gDNA remover Buffer | 1 µL |
| RNase-free Water | UP to 10 µL |
42℃ 2 min，60℃ 5 min，立即置于冰上冷却，短暂离心
*总RNA 10 ng~5µg；mRNA 0.5 ng~0.5µg。
2.继续加入如下逆转录试剂
*总RNA 10 ng~5µg；mRNA 0.5 ng~0.5µg。
2.继续加入如下逆转录试剂
| 组分 | 组分 |
| dNTP Mix(10 mM) | 1 µL |
| GoldenstarTM Oligo(dT)17(50 μM)or Randomer* | 1 µL |
| 5×GoldenstarTM Buffer | 4 µL |
| DTT(0.2M) | 1 µL |
| GoldenstarTM RT6 (200U/µL) | 1 µL |
| RNase-free Water | 2 µL |
*产物用于cDNA全长扩增，则使用Oligo(dT)17；产物用于qPCR，则使用Randomer。
3.反转录程序
如果用GoldenstarTM Oligo(dT)17或GSP：55℃30~50 min，85℃ 5 min
如果用GoldenstarTM Randomer：25℃10 min，55℃30~50 min或15 min（产物用于qPCR），85℃ 5 min
【问题讨论】
Q1：逆转录后，产物产量低或质量不佳？
A1：
1）RNA模板用量过低。建议提高模板用量至说明书建议范围；
2）RNA模板具有复杂二级结构。建议采用更高反应温度的产品（TSK302）及推荐的复杂模板反应程序；
3）逆转录引物选择不佳。根据建议选择合适的逆转录引物；
4）RNA模板中含有反应抑制物。建议对模板进行去抑制物处理或稀释后逆转；
5）RNA模板降解。建议对RNA模板进行检测，使用质量好的模板，保证在无核酸酶的操作环境里进行逆转录实验，避免外界RNA酶污染；
6）RNA模板存在污染。建议对RNA模板进行检测，使用质量好的模板；
7）逆转录体系、程序及加样等操作不当。建议按照说明书规范操作。
Q2：擎科逆转录系列适用于microRNA逆转录吗？
A2：可以。但仅适用于茎环法，针对目的microRNA序列设计特异性的茎环引物和qPCR引物，逆转时使用茎环引物和内参引物即可。（详细实验方案可咨询当地技术支持或发送邮件至product@tsingke.net）
Q3：逆转录试剂盒中DTT出现了沉淀，还能继续使用吗？
A3：不可以，必须更换DTT。DTT全名为二硫苏糖醇，还原剂。常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可以阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子在内或分子间二硫键。
【实例分享】
使用GoldenstarTM RT6 cDNA Synthesis Kit Ver.2逆转录小鼠RNA得到cDNA，稀释。
针对小鼠MOCT4基因设计Real-time Quantification PCR引物，使用本公司2×T5 Fast qPCR Mix（SYBR Green I）试剂盒（TSE202）进行qPCR反应。
3.反转录程序
如果用GoldenstarTM Oligo(dT)17或GSP：55℃30~50 min，85℃ 5 min
如果用GoldenstarTM Randomer：25℃10 min，55℃30~50 min或15 min（产物用于qPCR），85℃ 5 min
【问题讨论】
Q1：逆转录后，产物产量低或质量不佳？
A1：
1）RNA模板用量过低。建议提高模板用量至说明书建议范围；
2）RNA模板具有复杂二级结构。建议采用更高反应温度的产品（TSK302）及推荐的复杂模板反应程序；
3）逆转录引物选择不佳。根据建议选择合适的逆转录引物；
4）RNA模板中含有反应抑制物。建议对模板进行去抑制物处理或稀释后逆转；
5）RNA模板降解。建议对RNA模板进行检测，使用质量好的模板，保证在无核酸酶的操作环境里进行逆转录实验，避免外界RNA酶污染；
6）RNA模板存在污染。建议对RNA模板进行检测，使用质量好的模板；
7）逆转录体系、程序及加样等操作不当。建议按照说明书规范操作。
Q2：擎科逆转录系列适用于microRNA逆转录吗？
A2：可以。但仅适用于茎环法，针对目的microRNA序列设计特异性的茎环引物和qPCR引物，逆转时使用茎环引物和内参引物即可。（详细实验方案可咨询当地技术支持或发送邮件至product@tsingke.net）
Q3：逆转录试剂盒中DTT出现了沉淀，还能继续使用吗？
A3：不可以，必须更换DTT。DTT全名为二硫苏糖醇，还原剂。常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可以阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子在内或分子间二硫键。
【实例分享】
使用GoldenstarTM RT6 cDNA Synthesis Kit Ver.2逆转录小鼠RNA得到cDNA，稀释。
针对小鼠MOCT4基因设计Real-time Quantification PCR引物，使用本公司2×T5 Fast qPCR Mix（SYBR Green I）试剂盒（TSE202）进行qPCR反应。
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