肠出血性大肠杆菌（O157:H7）检测试剂盒

【包装规格】：

48反应/盒

【试剂盒成分】：

【储存条件及有效期】：

储存条件：储存温度≤ -20 oC，避光保存，避免重压、反复冻融；产品有效期：12个月。

【操作步骤】：

1.试剂准备（在试剂准备区进行）

1.1取出包装盒中的各组分(冻干粉除外)，室温放置，待其温度平衡至室温后，混匀后瞬时离心备用。

1.2根据待测样本，阴性对照，阳性对照的数量装备冻干粉，每个干粉反应管加入45 μL R buffer （注意：R buffer需完全融化混匀，否则会对实验效果产生影响）；

2样本加样（在样本处理区进行）

2.1向反应管中加入2.5 μL核酸模板（正对照反应请加入试剂盒提供的2.5 μL正对照模板）；

2.2每个反应管加入2.5 μL B buffer, 盖好管盖（对于多个反应，建议将B buffer加至反应管的盖子内侧）；上下颠倒反应管8-10次充分混合，混匀后，将反应液甩（或快速离心）至管子底部，转移至扩增区。

3 核酸扩增（在扩增区进行，请参照各仪器说明书进行设置）

3.1 将反应管放入荧光检测设备中并记录样本放置顺序。荧光检测程序设置为：恒温39 oC；每30 s采集一次FAM通道荧光值，共40个循环；反应时间20 mins。

注：如使用ABI系列PCR仪，请务必于passive reference和quencher处均选择“none”。

【结果判读】：

1. 建议使用我公司推荐的恒温荧光扩增仪（WL-1）.

阳性判断：有 “S”型扩增曲线，机器显示结果为“+”；

阴性判断：无 “S”型扩增曲线，机器显示结果为“-”；

注：当受样本颜色或其他因素影响，显示结果为“+”但并无 “S”型扩增曲线时，结果依然判定为阴性。

2. 使用荧光定量PCR设备时请在确定扩增过程中有类似“S”型扩增曲线时，结合以下原则进行判读，若无则判定为阴性：

【注意事项】：

1.  由于试剂盒灵敏度非常高，在进行反应时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。为了防止污染，实验需要分区操作。

2.  实验过程中穿戴工作服和一次性手套，操作中产生的所有废弃物及时处理。

3.  试剂盒保质期12个月。每次使用时，请取出实验所需的反应单元的数量，置于冰浴条下并在8小时内使用；剩余部分，请置于存储条件下。