DPPH自由基是一种较稳定的含氮自由基,有一个单电子,在517nm下有强吸收,如果有其他物质提供一个电子使此单电子配对,其吸收会消失褪色,褪色程度与接受电子的量呈正比。即反应物清除氮自由基的能力与试剂在517nm的吸光值成反比。
二.试剂组成试剂一:DPPH试剂100μL支
试剂二:100μg/mL 维生素C标准溶液 1ml×1支
三.储存条件及有效期试剂盒-20℃可保存6个月。
四.试剂的配制试剂一:37℃平衡20min以上,待试剂融化后,在试剂瓶中加入10ml 95%乙醇或无水乙醇,剧烈震荡使试剂充分溶解。
注意:溶解一定要充分,如有条件可采用超声波助溶。
试剂二应用液:根据是否需要制作阳性对照标准曲线有两种配制方法。
1. 如仅需要将维生素C作为质控品,可取100μL 试剂二,加入900μL样品稀释液,充分混匀,配制成10μg/mL 维生素C;
2. 如需测定维生素C的IC50,可分别移取0,2,5,10,15,20,25,30,40,50μL 试剂二于空离心管中,再依次加入100,98,95,90,85,80,75,70,60,50 μL样品稀释液,充分混匀。配制成0,2,5,10,15,25,30,40,50 μg/mL 维生素C样品。
五.操作步骤
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空白孔1 |
测定孔 |
对照孔2 |
质控孔 |
试剂一(μL) |
100 |
100 |
0 |
100 |
样品溶液(μL) |
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100 |
100 |
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试剂二应用液(μL) |
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100 |
样品稀释液(μL) |
100 |
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充分混匀,室温避光静置30min使之充分反应。517nm处采用酶标仪测定吸光值。
品名 |
价格(元) |
Stock |
A001-酶标板法 |
510 |
YES |
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