真菌基因组DNA快速提取试剂盒

本产品采用独特的真菌裂解技术，能够裂解包括孢子在内的各种真菌坚硬的外壳，同时结合硅胶膜离心吸附柱技术纯化真菌DNA，通过氯仿抽提，有效去除蛋白等杂质污染，提取的DNA纯度高，OD 260/280≈1.9，大小在30-50 kb之间，可直接用于各种PCR、酶切、Southern blot 等常规分子生物学实验。本产品安全无毒，操作简单，整个操作过程大约需要40 min。
产品信息：

组分	总量	备注
真菌裂解液 1（FLB1）	50ml	如有沉淀，65℃加热溶解后使用
真菌裂解液 2（FLB2）	50ml	4℃保存
膜结合液（MB）	50ml
通用漂洗液（WB）	50ml
通用洗脱液（EB）	10ml
离心吸附柱及收集管	50套	密闭干燥保存

实验准备： 自备的材料：液氮，氯仿，1.5 ml 灭菌离心管，研钵，涡旋振荡器，台式离心机，65℃水浴，冰浴。 操作步骤： 1、称取0.1-0.5 g湿的真菌菌丝、孢子、子实体或0.1-3 ml液体培养物离心得到的沉淀，转移到塑料研钵中，液氮研磨成粉 后转移到新的1.5 ml离心管中。 注：1）尽量避免使用陶瓷或玻璃研钵，以免二氧化硅吸附 DNA影响得率。2）干燥菌丝或子实体等的使用量应比上述推荐量低 5-10倍。 2、向离心管中加入1 ml 65℃预热的真菌裂解液1（FLB1），并用移液器充分吹打混匀。 3、65℃孵育5-30 min，其间吹打混匀2-3次。 4、室温12,000 rpm离心3 min。 5、将不超过750 µl的上清液转移到新离心管中。 注：上清液中偶有少量细小悬浮物，对后续操作无影响，无需特殊处理。 6、在上清液中加入等体积的真菌裂解液2（FLB2），上下颠倒30 s充分混匀，溶液将呈白色浑浊状。 7、冰浴5-10 min。 8、室温12,000 rpm离心3 min，转移上清到新的1.5 ml 离心管中。 9、加入0.2 ml氯仿，剧烈振荡30 s充分混匀。 10、室温12,000 rpm离心3 min，小心转移不超过600 µl的上清液到新的1.5 ml离心管中，注意避免触及两相交界面的白色 膜状物。 11、加入1.5倍体积的膜结合液（MB），上下颠倒30 s混匀，分次转移到离心吸附柱中。 12、每次转移700-800 µl混合液后，室温放置5-10 min。 13、室温12,000 rpm离心1 min，弃除收集管中的废液。 14、将剩余的样品加到离心吸附柱式中，重复第12-14步的操作。 15、加入700 µl的通用漂洗液（WB），室温12,000 rpm 离心1 min，弃除收集管中的废液。 16、加入300 µl的通用漂洗液（WB），室温12,000 rpm 离心30 s，弃除收集管中的废液。 17、再次离心1 min去除残留液体。 18、将离心吸附柱放置在一个新的1.5 ml离心管中，加入30-100 µl通用洗脱液（EB），室温放置5 min。 19、离心1 min，收集真菌DNA溶液。 20、（可选步骤）重复洗脱一次，以获得更多的DNA。 21、DNA溶液可立即使用，也可适量分装后于-20℃长期保存。