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| 销售商： 上海雅吉生物科技有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
- 介绍： 基因型:F- mcrA (mrr-hsdRMS-mcrBC) 80lacZM15 lacX74 recA1 endA1 araD139 (ara, leu)7697 galE15 galK λ- rpsL nupG简 要 说 明High5TM系列DH10B感受态细胞只能用于电击转化而不能用于热激转化。DH10B菌株来源于MC1061菌株，mcrA、mcrBC及mrr突变使DH10B菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA ，无论真核生物还是原核生物的基因组DNA都能被高效的转入DH10B中。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。φ80dlacZ∆M15标记的存在使DH10B可用于蓝白斑筛选，rpsL赋予其链霉素抗性。High5TM系列DH10B感受态细胞适用于大质粒的构建或者各种文库构建。High5TM系列DH10B感受态细胞经特殊工艺制作，经 pUC19质粒检测，转化效率>1010cfu/μg。 操 作 说 明1. 0.1cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。2. 取-80℃保存的High5TM 系列DH10B感受态细胞放入冰浴中融化，加入1 μl目的DNA (质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀立即插入冰中。A. 测定转化效率使用1 μl 10 pg/μl的对照质粒pUC19；B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA后适量TE缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬，保证DNA浓度不超过100 ng/μl。3. 用200 μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=2.4 kV (此为BioRad 电转仪推荐参数，使用者也可按所用电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。5. 立即 向电击杯中加入1ml不含抗生素的无菌培养基 S.O.C.，混匀后转移到空50ml管中，并用1ml SOC轻柔冲洗电转杯并转移到50ml管中，另补加3ml SOC培养基， 37℃，200 rpm复苏60分钟。6. 5000rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200 μl涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少13h。注 意 事 项1.加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10。2.当质粒不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。3.若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。4.对于连接产物转化，最好转化前用乙醇沉淀DNA后适量TE缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产物，保证DNA浓度不超过100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加打火的风险。5.混入质粒时应轻柔操作。6.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
- 储存条件： -80℃
- 用途： 克隆感受态细胞
- 注意：部分产品我司仅能提供部分信息，我司不保证所提供信息的权威性，仅供客户参考交流研究之用
试剂盒售后：本公司出售的试剂盒均保质保量，质量问题均可免费退换，另提供免费代测服务。
细胞售后：
1. 细胞运输丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；
3. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，未告知的视为产品合格。4-10天内出现问题，请提供细胞照片和细胞出现问题的照片以及细胞相关操作的详细步骤，并跟我公司人员及时沟通判定是否重发，具体可以参照我官网或者随货说明书相关售后条款。
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手机版：DH10B 电击感受态细胞
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