产品名称:
牛肾盂肾炎棒杆菌PCR试剂盒
产品规格:50T
产品运输,-20℃保存,避免反复冻融,有效期一年。
限于网页篇幅此处仅做简要说明,如需详细PDF文档说明书,可联系我们客服免费索取
使用本试剂盒提供的阳性对照时,由于其浓度较高,一定要注意不要污染其他试剂和成分。最好在专门的区域操作。
适用仪器:ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。
牛肾盂肾炎棒杆菌PCR试剂盒具有下列特点:
1.即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板。
2.根据指标保守区域设计引物和探针,能专一性地检测出样品中的指标成分,且不能检测其他非成分。
3.提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4.一管式闭管操作,降低了交叉污染。
本产品只能用于科研,足够50次20uL 体系的荧光定量 PCR。
牛肾盂肾炎棒杆菌PCR试剂盒注意事项
1.整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作,各区实验服、仪器、耗材应独立使用,不能混用;实验用吸头采用带滤芯吸头;样本处理区应配有生物安全柜,样本处理在生物安全柜中进行操作;三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2.为避免RNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3.每次实验应该设置阴、阳性对照。
4.试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心。
5.试剂盒内所配阴性和阳性对照在第一次使用前应全部转移至标本准备区,并单独存放。
6.为防止荧光干扰,应避免裸手直接接触PCR反应管,并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7.仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置;不同批号试剂不能混用。
8.ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正,淬灭基因选择None。
9.实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。
牛肾盂肾炎棒杆菌PCR试剂盒操作步骤:
一、稀释标准曲线样品(以10E2-10E7拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。
1.标记6个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
2.用带芯枪头分别加入45μL 荧光 PCR 专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同)。
3.在7号管中加入5μL阳性对照(浓度为 1×10E8 拷贝/μL,试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头,在6号管中加入5μL1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头,在5号管中加入5μL1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7.用自选方法纯化样品的DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8.如果有N个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置qPCR 反应(20μL体系,在样品制备室进行)
9.如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 N+9 个PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),6 个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做 1 次重复,则标记 N+4 个PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于PCR 阴性对照(用水做模板),1 个用于PCR 阳性对照(用第一步稀释得到的标准曲线系列稀释液的第 4 号做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10.在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复):
四、数据处理
11.如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的log 值,再推算出其浓度。
12.如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于30。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间,则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则为阴性,如果小于 40,则为阳性。
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