探针法荧光定量PCR冻干试剂盒

特别提示：包括探针法荧光定量PCR冻干试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：探针法荧光定量PCR冻干试剂盒
英文名称：Lyophilized Fast DNA TaqMan PCR Kit
产品货号：MT0136
产品规格：20μL×200T|20μL×1000T

本试剂盒是采用TaqMan探针法进行实时荧光定量PCR的专用试剂，适合于FAM/HEX/TET/JOE/ROX等双标记探针（本品也适用于Molecular Beacon探针），广泛应用于DNA和cDNA的相对定量检测等。

本试剂盒中的TaqMan PCR Reagent为冻干试剂，将热启动Fast Taq DNA聚合酶、dNTP等做成冻干品试剂，制品性能稳定，可长期保存。当加入2×TaqMan Buffer溶解后，试剂变为常规TaqMan PCR Mix单组分预混试剂，进行实验时，PCR反应液的配制十分方便简单，只需加入引物、探针、DNA或cDNA模板、水即可。该制品不含有ROX校正染料，适用于适合于各种荧光标记探针，并且适用于各种定量PCR机型。

本试剂盒中的Fast Taq DNA聚合酶采用专有的热启动技术确保55℃以下没有任何活性，因此可在室温建立反应体系。Fast Taq DNA聚合酶具有卓越的扩增速度，因此满足快速PCR程序，通常在30min以内可以完成扩增反应。同时该聚合酶具有耐受杂质的能力，同样适用于粗制核酸样本的扩增反应。

试剂盒特点：
· 热启动酶采用专有的修饰方式，30s热启动；
· 干粉制品，性能及其稳定；
· 卓越的扩增性能，耐受样本中的杂质能力强；
· 高灵敏度，可检测低丰度基因；
· 适用于所有实时定量PCR仪器。

试剂盒组成：
 

组分	规格
Lyophilized Fast DNA TaqMan PCR Reagent	2瓶
2×TaqMan PCR Buffer5	1ml×2

保存条件：RT，有效期一年。

反应实例：
以人A549细胞提取的总RNA（0.64pg-10ng）为模板进行反转录，反转录后分别取2μl cDNA产物，应用本制品进行qPCR，1-8RNA模板分别为：10ng、2ng、0.4ng、0.08ng、16pg、3.2pg、0.64pg和H2O。


A：扩增曲线；


B：标准曲线。

使用方法：

1.溶解冻干制品
每瓶中加入1ml TaqMan PCR Buffer 5溶解冻干品，溶解后的制品为2倍浓度的TaqMan PCR Mix试剂（2×TaqMan PCR Mix）。溶解后的剩余试剂可置于-20℃保存，下次实验融化后直接使用即可。

2.配置反应体系
按照如下组分配制20μl PCR反应体系
 

成分	用量	终浓度
2×TaqMan PCR Mix（溶解后）	10μl	1×
PCR Forward Primer (10μM)	0.4μl	0.2μM
PCR Reverse Primer (10μM)	0.4μl	0.2μM
TaqMan Probe (10μM)	0.4μl	0.2μM
cDNA或DNA模板	0.5~2μl
ddH2O	up to 20μl

注意：通常使用0.4μl的扩增引物可获得理想的扩增结果，必要时可在0.2~0.8μl之间进行调整。在双探针检测时通常探针用量减半，扩增引物浓度保持不变。

3.进行Real-Time PCR反应，通常采用两步法，程序如下：
 

温度	时间	循环数
95℃	30s	1
95℃	5s	40
60℃	20s

根据您的关注的探针法荧光定量PCR冻干试剂盒，冻干TaqMan探针法PCR试剂，TaqMan Probe qPCR试剂盒，您可能还对以下产品有需求：



名称：PCR抑制物清除剂
货号：BTN60804
规格：1mL
用血液、土壤、植物、中药材等样品中提取的DNA 经常含有会抑制PCR的产物。本产品专门用于解除这些PCR 抑制剂的抑制作用，使DNA 能够用于PCR扩增。

产品特点：
1. 使用简单，直接加入PCR反应体系中使用。
2.适用范围广，可以用于解除血液、土壤、植物、中药材等DNA样品中的PCR 抑制剂。

低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：将本产品按1：10的比例加入到PCR反应体系中即可进行PCR，如果PCR反应体系为50μL，则需要加本产品5μL。

名称：即用型PCR试剂盒(染料法)
货号：BTN90408
规格：1mL
本产品是基于荧光染料检测的即用型PCR试剂盒，可以对靶片段进行实时定量PCR分析（quantitative PCR、qPCR）。产品含有经过优化的缓冲液组分、Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2及新型荧光染料GreenDNA等所有实时定量PCR所需要的成分，用户只需加入模板和引物即可进行实时定量PCR反应和HRM分析，具有广泛的用途。

产品特点：
1.方便，用户只需准备模板和引物既可以进行实时定量PCR实验和HRM（High Resolution DNA Melt Curve Analysis）分析。而基于SYBR Green I和LC Green染料的qPCR mix则不能同时用于上述两种实验。
2.使用第三代饱和型荧光染料，信号强，不会抑制PCR反应。
3.快捷，即用型的预配液使加样操作步骤大大简化，避免了交叉污染，降低实验误差。
4.各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。能检测到浓度为50拷贝/mL的靶分子。

使用方法：
 

• 以20μL的qPCR反应体系为例：在一干净的PCR管中，加入下列成分：
  
   

  反应体系成分	20μL体系	终浓度
  2×GreenDNA qPCR MagicMix	10μl	1×
  自备引物一a	x μl	0.1-0.5μM
  自备引物二a	x μl	0.1-0.5μM
  自备模板a	xμl
  自备ROXb	2μl	根据不同仪器选择
  补超纯水到	20μl

  
  放入荧光PCR仪中进行扩增，并在退火或延长步骤中记录荧光信号。
  
  注意：
  a．通常引物浓度以0.2μM可得到较好结果，可以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考；通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
  
  b．ROX校正染料：如果使用ABI公司的7500，7700和7900三种型号的荧光
  PCR仪器，则需用自备的ROX进行Ct值校正。
  对ABI 7700和7900，ROX的最佳浓度为1×（即在每20μL反应体系中加2μL 10×ROX）。
  对ABI 7500，ROX的最佳浓度为0.05-0.1×（每20μL反应体系加0.1-0.2μL 10×ROX；也可将10×ROX稀释到1×，然后每个反应体系加入1-2μL 1×ROX）。ROX会在溶解曲线中产生噪音，因此，如果出现了杂峰，将软件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”选项取消打勾，然后重新分析数据。
  对于iCycler IQ，MJ Opticon，MJ Chromo4，MX3000，MX4000,RotorGene3000，RotorGene 6000和LightCycler 480等型号的荧光PCR
  仪器，ROX不是必须的，但加入的话也不会影响整个PCR分析。
• 循环步骤：根据扩增子的性质和仪器性能，从以下三个过程中任选一个进行扩增
  
  A：两步快速循环法：适用于引物Tm值设计为60℃的反应
   

  步骤	温度	时间	循环数
  酶活化	95℃	10min	1
  变性	95℃	15s	35～40
  退火&延伸	60℃	1min

  
  注意：本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10min条件下实现酶的活化。退火温度请以60-64℃作为设定范围的参考，发生非特异性反应时，可提高退火温度。
  
  B：三步快速循环法：适用于延伸步骤温度高于退火步骤的PCR（长引物PCR）
   

  步骤	温度	时间	循环数
  酶活化	95℃	10min	1
  变性	95℃	10s	35～40
  56-64℃a	60℃	30s
  延伸	72℃b	32s

  
  注意：
  a．退火温度：建议采用两步法PCR，退火温度60℃进行反应。若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考。若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，三步法的退火温度请以56℃-64℃的范围作为设定参考。
  b．延伸温度：延伸温度设为72℃通常可以提高扩增效率。但是，对于AT含量大于70%的扩增子来说，延伸温度设为60℃为宜。
• 数据采集
  具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在没结合DNA时，最大吸收光谱在471nm，结合DNA时的最大吸收光谱在500nm，最大发射光谱在530nm。

其他注意事项：
1.如果使用iCycler，可以不加入FAM。
2.如果使用Roche LightCycler的玻璃毛细管进行PCR，需加入终浓度为0.5mg/mL的自备BSA。

关注探针法荧光定量PCR冻干试剂盒，冻干TaqMan探针法PCR试剂，TaqMan Probe qPCR试剂盒的同时，为您推荐更多您可能感兴趣的产品：


BTN80205 DMSO，PCR级 1.5mL
BTN51208B dNTP溶液(10mM) 0.5mL
WE0101 Taq DNA聚合酶 500U|2500U|10000U
WE0127 全血Taq DNA聚合酶 2500U
RFT104 M-MLV反转录酶(缺失RNase H活性) 2000U
JN0040 2×Fast Taq PCR MasterMix 1ml×5
JN0062 双链DNA染料(SYBR Green) 0.5ml×5
HQF11 全血免抽提直接PCR试剂盒 100次|500次|1000次

北京百奥莱博科技有限公司一家专注于生命科学研究领域的生物技术公司，坚持“质量至上，服务为本，全心全意助力生命科学”的理念，为广大用于提供稳定、可靠、专业的产品和服务支持，产品线包括分子生物学，细胞生物学，免疫检测，抗体，重组蛋白，血液制品等系列。“忙忙碌碌的平凡，铸就事业的不凡”。让我们携起手来，共同创造生命科学的蓬勃发展。