2×BaHF MasterMix

特别提示：包括2×BaHF MasterMix在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：2×BaHF MasterMix
产品货号：WE0413
产品规格：1ml|5ml|25ml

本品为由BaHF DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×，具有操作简便快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好的优点，可最大限度地减少人为误差和污染。该聚合酶具有5′-3′DNA聚合酶活性，5′-3′外切酶活性和3′-5′外切酶活性，在普通PCR条件下，与BaHF DNA Polymerase相比，具有扩增效率高、错配率低的优良性能。化学修饰后的酶在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟，该条件可以整合入已有的PCR热循环程序。优化的缓冲体系使酶的作用发挥最大功效，实现对目的片段的高保真、高特异性、高扩增效率、高灵敏度扩增。本品不含染料，PCR程序结束后可根据需要加入适量上样缓冲液后进行电泳操作。扩增得到的大部分PCR产物3′端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。适用于常规的PCR反应和对高保真性有要求的基因克隆等实验。

产品组成：
 

组份	1mL	5mL	25mL
2×BaHF MasterMix	1mL	5×1mL	5×5mL
ddH2O	1mL	5×1mL	5×5mL

【注】：
● 2×BaHF MasterMix含有BaHF DNA Polymerase,3.4mM MgCl2和400μM each dNTP。
保存条件：-20℃。如需频繁使用，2-8℃保存。
质量控制：
经检验无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主残余DNA；能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因；2-8℃存放三个月，活性无明显改变。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
 

试剂	50μL反应体系	终浓度
2×BaHF MasterMix	25μL	1×
Forward Primer，10μM	2μL	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μL	0.4μM
Template DNA	＜0.5μg	＜0.5μg/50μL
ddH2O	up to 50μL

【注】：
● 引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10min
变性	94℃	30s	30-40个循环
退火	55-65℃	30s
延伸	72℃	60s
终延伸	72℃	5min

【注】：
● 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
● 延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品中所包含的BaHF DNA Polymerase的扩增效率为1-2 kb/min。
● 可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
● 本产品须在预变性95℃，10min条件下实现酶的活化。

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货号	名称	规格
SV0908	LongAmp Taq PCR 试剂盒	100次(50μl体系)
SV1300	100 bp DNA Ladder	500gel lanes|100gel lanes|50gel lanes
SV1507	α2-3 神经氨酸苷酶 S	1KU|200U
SV1581	甲基化DNA富集试剂盒	25次
SV1616	ACP 合成酶	25 nmol (40 μM)
SV1646	SNAP-Cell 启动试剂盒	1套

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名称：Golden Gate 组装混合液
货号：SV1011
规格：15次
特性:
无痕克隆 - 组装后无额外碱基存在
可用于组装重复区
兼容片段长度广（＞15 kb 至 ＜100 bp）
有效组装高 GC 区
概述:
Golden Gate 可高效、无痕的克隆组装 DNA 片段，该方法起始于 1996 年，这是第一次使用 IIS 型限制性内切酶的和 T4 连接酶顺序或同时的活性将多个目的基因插入到同一个载体骨架上。这类核酸内切酶产生用户确定唯一的末端序列，该内切酶在识别位点之外进行切割。产生可连接的 DNA 突出末端，临近的互补 DNA 末端退火。一旦组装上，结构中内切酶的识别位点已经不存在。因为每一个互补可连接的 4 碱基突出端都是钝端（内切酶识别位点已经不存在），目的组装产物随时间逐渐积累。特别适用与多重组装实验，例如 TALEs （Transcription Activator Like Effectors）（5）和 TALENs（TALEs fused to a FokI nuclease catalytic domain）（6）。Golden Gate 方法也适用于单一目的基因的克隆实验。
我公司Golden Gate 组装混合液包含:
- 我公司Golden Gate 组装混合液
- Golden Gate 反应缓冲液（10X）
质保声明:
我公司Golden Gate 组装混合液经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

名称：瞬时粘性末端连接酶预混液
货号：SV1035
规格：250次|50次
特性:
瞬时连接粘性末端
dsDNA 切刻修复
构建高丰度克隆文库
概述:
瞬时粘性末端连接酶预混液是一种即用型 2X 预混液，内含 T4 DNA 连接酶、专属连接增强剂和经过优化的缓冲液。该预混液是专门为瞬时连接粘性末端（2-4 bp）和提高转化效率而设计，它还简化了建立反应所需的步骤，优
化了酶和缓冲液的比例。因为该预混液在 -20℃ 储存时为液体状态，所以使用时无需解冻，特别是无需温育时间就能高效连接粘性末端底物，反应时仅需加入预混液及互补末端 DNA，混匀后转化，从而节省了克隆连接反应的时间。此外，亚克隆连接可以以低浓度在很小的体系里完成，节省用户宝贵的 DNA 样品，并且无需稀释可直接转化到多种化学感受态大肠杆菌中。
来源:
纯化自重组 E. coli 菌株，含有编码 T4 DNA 连接酶的基因。
反应条件:
在 10 μl 反应体系中加入 1X 瞬时粘性末端连接酶预混液和 DNA 底物。10 μl 反应体系中包含 1,800 个 T4 DNA 连接酶粘性末端单位。
质保声明:
该试剂经过严格的质量控制检测，以确保酶的高纯度和高效率。
注意事项:
该预混液在 -20℃ 储存时为液体状态。-70℃ 保存时，反复冻融 20 次后，检测反应效率无明显变化。

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