Lowry蛋白定量检测试剂盒

特别提示：包括Lowry蛋白定量检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Lowry蛋白定量检测试剂盒
产品货号：KFS434
产品规格：1000T

蛋白质在碱性溶液中其肽键与Cu2+螯合，形成蛋白质一铜复合物，此复合物使酚试剂的磷钼酸还原，产生蓝色化合物，在一定条件下，利用蓝色深浅与蛋白质浓度的线性关系作标准曲线并测定样品中蛋白质的浓度。

Lowry法测定较为不受脂类物质干扰，适于脂类含量较高的样品测定，也能耐受相当浓度的去垢剂如SDS。本试剂盒可进行1000次1mL比色杯测定。

试剂盒组成：
 

组分	规格
蛋白质标准溶液（2.5mg/mL）	10mL
5×Buffer A-1	100mL
5×Buffer A-2	100mL
Buffer B-1	10mL
Buffer B-2	10mL
Folin-酚试剂（1N）	100mL

注：
 

• 1×Buffer A工作液配制：用前将5×Buffer A-1、5×Buffer A-2（如储存温度较低，可能有结晶析出，可37℃水浴加热溶解）用蒸馏水稀释5倍后等体积混合即得1×Buffer A工作液；


• BufferB工作液配制：用前将Buffer B-1与Buffer B-2等体积混合即得BufferB工作液；


• 碱性铜试剂工作液配制：1×Buffer A工作液、BufferB工作液按50：1比例混合，即为碱性铜试剂工作液。该工作液须在24小时内使用，过期失效。


• 蛋白质标准工作液（0.25mg/mL）配制：蛋白质标准溶液（2.5mg/mL BSA）用前用蒸馏水稀释10倍至蛋白质标准工作液（0.25mg/mL）。

操作步骤：
 

• 标准曲线的绘制：
  取6个带盖的1.5mL离心管，编好号后，按下表顺序加入试剂，按下表顺序加入试剂：
   

  管号	0	1	2	3	4	5
  0.25mg/ml的蛋白质标准工作液（μl）	0	40	80	120	160	200
  蒸馏水（μl）	200	160	120	80	40	0
  碱性铜试剂工作液（ml）	1	1	1	1	1	1
  每管加后立即混匀，置20～250C水浴保温10分钟
  1N Folin-酚试剂（μl）	100	100	100	100	100	100
  蛋白质含量（μg/μl）	0	0.05	0.10	0.15	0.20	0.25

  
  具体步骤：每管加入碱性铜试剂工作液后需立即混匀：，20～25℃放置10min后加入Folin-酚试剂，混匀后，20～25℃放置30min后在750nm下比色测定（1mL比色杯，1cm光径测定）。以蛋白含量（μg/μl）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；


• 稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为200μl，加入碱性铜试剂工作液1000μl，充分混匀，置20～25℃水浴保温10分钟后，加入1N Folin-酚试剂100μl，20～25℃放置30min后，以标准曲线0号管做参比，在750nm波长下比色，记录吸光值；


• 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白质含量（μg/μl），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度。

注意事项：
 

• 还原物质、酚类物质对此反应有干扰。


• 如染料吸附到比色杯上，可用甲醇清洗。

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名称：增强型DAB显色试剂盒
货号：BTN81223
规格：100mL
增强型DAB显色试剂盒中含有检测辣根过氧化物酶(HRP)的所有试剂，适合于检测各种印迹膜上标记的HRP。其反应原理是HRP可以催化底物DAB在目的蛋白所在的位置转变为深褐色的化合物，可根据颜色的有无和深浅来检测HRP的存在与否或存在量，进而推测HPR标记物识别的靶分子的位置及含量。该反应的示意图如下：


产品特点：
1．即开即用，不需要用户准备任何材料。
2．DAB以干粉提供，方便运输。
3．可用于各种印迹膜(包括Southern、Northern、Western印迹膜)和免疫组化中的组织切片。免疫组织显色后还可用Nuclear fast red复染。
4．跟PVDF膜、尼龙膜兼容。
5．显色过程中需要避光，在显色后可拍照或扫描。

试剂盒组成：
 

成分	规格
DAB干粉	100mg
10mL棕色塑料瓶	1个
DAB溶解液	100ml
增强剂	1ml
H2O2	1ml
说明书	1份

 注意：本产品可以配制100mL增强型DAB显色液，但其具体使用次数根据跟印迹膜的大小密切相关。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期1年

自备试剂：超纯水、HRP标记物(抗体或探针)处理过的印迹膜。

使用方法：
1．从DAB溶解液中取5mL到一个10mL的棕色塑料瓶中(本试剂盒提供)，将100mg DAB干粉全部加入，充分振荡混匀，所得溶液即是20×DAB浓缩液。此溶液如果一次不能用完，可以分装成小管在-20℃避光放置6个月。
2．按每cm2印迹膜需要0.1mL DAB显色液的比例计算所需显色液的量，并按下表配制DAB显色液(此处以配制10mL为例，用户如需要配制其他体积，可按比例增减各成分用量)：
 

成分	用量
DAB溶解液	9.4ml
20×DAB浓缩液	0.5ml
增强剂	0.1ml
H2O2	10μl

 注意：此溶液必须立即使用。
3．如果是印迹膜，则迅速将印迹膜转移到上步得到的DAB显色液中，室温避光静置。待印迹膜上出现满意的条带时(一般需要2-3分钟，最长不超过10分钟，具体跟靶分子浓度密切相关)，迅速将印迹膜转移到盛有超纯水的托盘中摇晃，终止显色反应。数分钟后需要换水，共三次。用吸水纸吸干印迹膜上的水分，照相处理后避光干燥保存印迹膜。
4．如果是组织切片，则直接将DAB染色液滴加在切片上，室温避光放置10分钟，然后浸在超纯水中数次，空气中干燥后显微镜下检测或照相。

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货号	名称	规格
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