Benzonase核酸酶(Strep II标签)

特别提示：包括Benzonase核酸酶(Strep II标签)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Benzonase核酸酶(Strep II标签)
英文名称：Benzonase Nuclease(Strep-tag II)
产品货号：MT0170
产品规格：25KU|100KU|5000KU

Benzonase Nuclease是一种核酸内切酶，可将核酸降解成2~5个碱基的5‘单磷酸核苷酸，因其能高效降解任何形式（双链，单链，线状，环状）的DNA和RNA而没有蛋白裂解活性，又被称为“全能核酸酶”。Benzonase核酸酶能有效降低蛋白样品粘度，去除蛋白样品中核酸的污染，且无蛋白酶活性残留，核酸酶活性达1×10⁶U/mg蛋白。Benzonase核酸酶在降低粘性的同时，也具有多种其他用途，如：减少了样品处理时间，增加了蛋白产量，离心时时沉淀和上清分离的更彻底，更便于溶液的离心（尤其是超滤）；提高色谱纯化的效率等。

本公司Benzonase核酸酶包括以下四种：
 

名称	货号
Benzonase核酸酶	MT0068
Benzonase核酸酶(无内毒素)	MT0169
Benzonase核酸酶(Strep II标签)	MT0170
Benzonase核酸酶(Strep II标签，无内毒素)	MT0171

不同Benzonase核酸酶的用途及用量推荐：
 

实验类型	电泳蛋白样品制备	非药物蛋白生产	药物蛋白生产	疫苗、病毒生产	细胞药物
推荐货号	MT0068：科研试剂	MT0068：科研试剂 MT0170：Strep II标签	MT0169：无内毒素 MT0171：无内毒素，Strep II标签
细胞数量	1X106个细胞(10mg组织)	1g湿重（重悬液10mL）		1L发酵上清液	1L培养物
最低用量	125U(0.5μL)	25U/mL(1μL)	25U/mL(1μL)	0.1U/mL(0.4μL)	0.1U/mL(0.4μL)
推荐用量	500U(2μL)	250U/mL(10μL)	250U/mL(10μL)	25U/mL(100μL)	5U/mL(20μL)
作用时间	通常作用时间37℃在15~60min；25℃在30~120min；

带Strep II标签的Benzonase核酸酶融合了Strep-tag II标签（WSHPQFEK），使得在完成核酸消化后，方便的去除Benzonase。带Strep II标签的Benzonase核酸酶可牢固的结合于Strep Tactin XT Resin（货号：MT0180）上。由于Strep Tactin XT Resin和Strep Tactin Resin相比，其配体偶联牢固，不会造成蛋白脱落，因此通常在含有微量Strep-tag II标签的制品中，一步即可去除>98%的核酸酶污染，而Strep Tactin Resin无法达到。

无内毒素的两种Benzonase核酸酶，内毒素含量<40EU/mL（按照单位换算量计算为，每1000U中含有的内毒素<0.15EU），符合FDA关于核酸污染的处理规程，可适用于药用级别的研发和生产。

另外，核酸酶残留可通过我公司开发的基于荧光探针的Benzonase核酸酶残留检测试剂盒(MT0181)进行评测，15min即可完成检测，最低可检测到2ng/ml的核酸酶残留。

单位定义：
37℃，pH8.0反应条件下，在30分钟内使△A260值降低1.0(相当于完全消化37μg DNA)的酶量定义为一个活性单位。
注意：含大量蛋白、细胞壁、其它盐分的粗制品，对该酶活性有部分抑制作用，使用时需要增加酶的用量。

Benzonase核酸酶的应用：
 

• 蛋白提取时去除核酸污染：在重组蛋白纯化或组织细胞样品蛋白提取时，Benzonase核酸酶可有效降低样品粘度，利于下游操作；
• 与细胞或细菌裂解液配合使用，去除粗提物中的核酸，降低溶液粘性，提高蛋白质产量；
• 减少存放的外周血单细胞(PBMC)的结块现象；
• 降解核酸，利于不可溶性蛋白复性前高质量包涵体制备；
• 有效去除带负电荷的核酸对双向SDS-PAGE蛋白样品的影响，改善蛋白质的分离效果，增强2-DE分辨率；
• 疫苗和病毒样品制备中DNA污染的去除。

Benzonase核酸酶的应用实例分析：

 

图1：分别取不同量（0、0.125、0.25、0.5、1、5、10U）的Benzonase核酸酶消化人基因组DNA10min，进行琼脂糖电泳。	图2：A为未加Benzonase处理的，B为加Benzonase处理的样品进行二维电泳。如图所示，Benzonase处理的样品可显著增加二维电泳的分辨率。
图3：经RIPA裂解未经Benzonase核酸酶处理的样品，大量基因组DNA释放出来，呈鼻涕状。	图4：离心后，左管为未加Bezonase核酸酶，有鼻涕状粘稠物质悬浮在管中，右管为加Bezonase核酸酶，上清为透明液体。

Benzonase核酸酶具有超强兼容性：
Benzonase核酸酶在非常广泛的条件下，都能保持很高的稳定性和消化核酸的活性，这使其能够与多种细胞裂解液，如RIPA，或含有多种离子和非离子型去污剂、还原剂的蛋白提取试剂等兼容。例如：>100mM的盐酸胍会完全抑制Benzonase活性，1mM的EDTA会部分抑制Benzonase活性，5mM的EDTA会使活性丧失90%，1mM的PMSF则不会抑制核酸酶活性。浓度<0.4%的Triton?X-100对核酸酶活性几乎无影响，<0.4%的脱氧胆酸钠使核酸酶可保持70%的活性，超过该临界值之后核酸酶活性会急剧降低，1%的浓度会使活性丧失70%；0.05%的SDS对核酸酶活性几乎无影响，而SDS浓度在0.1%-1%之间时，核酸酶在变性后活性会急剧降低，可通过增加核酸酶的量使活性得到补偿。另外，核酸酶可耐受6M尿素，当尿素达到7M时，核酸酶在变性后活性会急剧降低，亦可通过增加核酸酶的量使活性得到补偿。
 

条件参数	最适条件	可作用条件范围
Mg2+	1-2mM	1-10mM
pH	8.0–9.2	6–10
温度	37℃	0–42℃
DTT	0–100mM	＞100mM
β-Mercaptoethanol	0–100mM	＞100mM
一价阳离子浓度（如Na+，K+）	0–20mM	0–150mM
PO43-	0–10mM	0–100mM

Benzonase核酸酶残留去除：
对于Strep II标签的Benzonase核酸酶（MT0170，MT0171）可通过Strep Tactin XT Resin（MT0180）直接去除，去除率>95%；对于不带标签的Benzonase核酸酶（MT0068，MT0169），可通过色谱纯化去除核酸酶，然后可通过核酸酶残留检测试剂盒（MT0181）或ELISA检测来判断去除是否成功。常见的色谱纯化方式有阳离子交换介质和阴离子交换介质，具体的Benzonase去除条件如下表：

 

阴离子交换介质	pH	样品和平衡缓冲液	Benzonase核酸酶
TMAE	7.0	50mM Tris/200mM NaCl	not bound
TMAE	7.0	50mM Tris/50mM NaCl	not bound
TMAE	8.0	50mM Tris/250mM NaCl	not bound
TMAE	8.0	＞50mM Tris/100mM NaCl	not bound
TMAE	9.0	＞50mM Tris/200mM NaCl	not bound
TMAE	9.0	50mM Tris/100mM NaCl	not bound
DEAE	7.0	50mM Tris/200mM NaCl	not bound
DEAE	7.0	50mM Tris/50mM NaCl	not bound
DEAE	8.0	50mM Tris/250mM NaCl	not bound
DEAE	8.0	＞50mM Tris/100mM NaCl	not bound
DEAE	9.0	＞50mM Tris/250mM NaCl	not bound
DEAE	9.0	50mM Tris/50mM NaCl	not bound
DMAE	8.0	＞50mM Tris/250mM NaCl	not bound
DMAE	8.0	50mM Tris/50mM NaCl	not bound
阳离子交换介质	pH	样品和平衡缓冲液	Benzonase核酸酶
SO3-	6.0	20mM phosphate/100mM NaCl	bound
SO3-	6.0	20mM phosphate/200mM NaCl	not bound
SO3-	5.0	20mM acetate/200mM NaCl	bound
SO3-	5.0	＞20mM acetate/700mM NaCl	not bound
SO3-	4.0	＞20mM acetate/300mM NaCl	bound
SO3-	4.0	20mM acetate/800mM NaCl	not bound
C00-	6.0	20mM phosphate/0mM NaCl	not bound
C00-	5.0	20mM acetate/40mM NaCl	bound
C00-	5.0	20mM acetate/100mM NaCl	not bound
C00-	4.0	＞20mM acetate/150mM NaCl	partially bound
C00-	4.0	20mM acetate/400mM NaCl	not bound

带Strep II标签的Benzonase核酸酶去除实验
50mL测试样品（20mM Tris-HCl，pH8.0，100mM NaCl，1mg/mL BSA，50U/mL Strep tagII Benzonase）。
在1~2mL/min流速下，穿过1mL Strep Tactin XT Resin，样本中的Benzonase核酸酶活性下降到<1U/mL（<1ng/mL）。

Benzonase核酸酶(Strep II标签，货号MT0170)广泛应用于以下用途：
 

• 蛋白提取时去除核酸污染
• 2D凝胶电泳
• Western Blot
• 生物制药
• 疫苗制备

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名称：T4 DNA聚合酶
货号：WE0238
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名称：AflII限制性内切酶
货号：SV0021
规格：10KU|2KU|1KU
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 50%
BalbBuffer 2.1: 100%
BalbBuffer 3.1: 10%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart、重组酶、省时酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液，37℃。
热失活:65℃ 20 分钟。
浓度:
20,000units/ml。
甲基化敏感性:
对 dam、dcm 和哺乳动物 CpG 甲基化均不敏感。

名称：BccI限制性内切酶
货号：SV0108
规格：5KU|1KU
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 100%
BalbBuffer 2.1: 50%
BalbBuffer 3.1: 10%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart、重组酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液，37℃。
热失活:65℃ 20 分钟。
浓度:
10,000units/ml。
甲基化敏感性:
对 dam、dcm 和哺乳动物 CpG 甲基化均不敏感。
注意事项:
甘油浓度＞5% 条件下可能出现星号活性。

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