非洲猪瘟LAMP检测试剂盒

特别提示：包括非洲猪瘟LAMP检测试剂盒(TaqMan探针法,冻干制剂)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：非洲猪瘟LAMP检测试剂盒(TaqMan探针法,冻干制剂)
英文名称：Lyophilized ASFV LAMP Kit(TaqMan Probe)
产品货号：MT015801A
产品规格：50T

本试剂盒基于LAMP-TaqMan技术，利用独特我司开发的独特的Bst DNA聚合酶技术，即具有LAMP快速、高灵敏度、恒温检测优点，同时克服了LAMP容易出现假阳性的问题。

LAMP是一种新型核酸扩增技术，因其具有的快速扩增能力，使其成为诊断试剂的明星潜力技术。但发展至今近20年时间，其仍然无法在诊断试剂领域获得广泛应用。LAMP技术的突出问题就是其假阳性、非特异扩增严重，无法产生高特异性信号。将类似标准定量PCR中的TaqMan探针技术应用到LAMP检测中，一直是分子生物家追求的目标。

我司依托强大的工具酶开发背景，开发出具有强链置换能力、高效DNA合成能力、具有外切活性的Bst DNA聚合酶5.0，无论以DNA为模板还是以RNA为模板，均可实现60～65℃恒温条件下类似TaqMan PCR方法的扩增。整个检测时间通常在15~25min内即可完成检测。应用该项技术后，在利用LAMP快速、高灵敏度、恒温检测优点的基础上，彻底解决了LAMP技术的假阳性问题。将TaqMan探针应用于LAMP扩增体系后，为LAMP技术更加广泛的应用于临床诊断奠定了坚实的基础。

试剂盒特点：
 

• 快速检测：可在15~25min内完成检测。
• 灵敏度高：可稳定的检测到单拷贝。
• 特异性高：六条特异性引物和一条TaqMan探针，保证了产物的特异性和检测的可靠性。
• 操作简单：恒温检测。
• 匹配便携式小型设备、可野外操作
• 适合粗样品的检测，无需核酸纯化制备。

试剂盒组成：
 

组分	规格
ASFV LAMP TaqMan Assay	1瓶
LAMP TaqMan Buffer 2D	1mL
ASFV阳性标准品（105Copy/μl)	1支

试剂盒性能：
 

• 靶标基因及探针：针对非洲猪瘟VP72外膜蛋白。
• 试剂盒灵敏度：试剂盒灵敏度与反应时间相关。
   

  60℃反应时间	检测灵敏度
  15min	10 Copy
  25min(推荐反应时间)	2 Copy
  35min	1 Copy

• 防污染的说明：LAMP反应高度敏感，反应结束后，务必不要打开管盖，以防止气溶胶污染。一旦发生气溶胶污染，请使用我司的DNA气溶胶污染去除剂（MT3001）进行环境清理。

仪器和程序设置：
LAMP TaqMan的检测可以使用标准定量PCR仪（也可使用恒温荧光设备），探针报告基团为FAM。
使用定量PCR仪进行LAMP TaqMan扩增程序如下：
步骤1：60℃ 10s
步骤2：60℃ 50s收集信号，循环25次
总反应时间为25min。

使用方法：
 

• 溶解LAMP TaqMan冻干制品小心打开西林瓶铝盖，向每瓶冻干品中加入1ml LAMP TaqMan Buffer 2D，放置在漩涡混合仪上漩涡10s将冻干制品溶解（或用1mL吸头吹打混合均匀）。溶解后的制品可立即使用或-20℃保存。溶解后的试剂标记为LAMP TaqMan Mix）。
• 溶解阳性标准品，阳性标准品为干粉形式，首次使用前加入100μl的ddH2O，漩涡10s溶解后，保存于-20℃。溶解后的制品浓度为10⁵copy/μl，每次实验时采用1μl即可。
• 配置反应体系
  溶解后的LAMP TaqMan Mix 20μl
  检测模板DNA 1μl
  反应体系配好后，充分混匀并短暂离心，置于荧光定量PCR仪上进行反应即可。

结果判定：
 

• 结果判读成立条件
  阴性水对照不起峰、阳性标准品在10~14min起峰条件下结果判读有效。
• 阳性结果判读
  有扩增曲线，判定为阳性。在25min以后起峰但不明显的情况下，通常拷贝数小于2拷贝。需要进行复核实验，仍然起峰的情况，表明为阳性。否则表明为阴性。
• 阴性结果判读
  平线表明为阴性样本。

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货号	名称	规格
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