SUMO蛋白酶

特别提示：包括SUMO蛋白酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：SUMO蛋白酶
英文名称：Small Ubiquitin-related Modifier Protease
产品货号：YTB4022
产品规格：200U|1000U|5000U

本制品是一种重组表达的高度特异性识别SUMO化修饰或SUMO结构域，并水解SUMO羧基端(C端) x-Gly-Gly-x肽段中Gly-Gly后的肽键，从而去除SUMO化修饰或者去除SUMO融合表达蛋白中SUMO结构域的蛋白酶。本产品是一种来自Saccharomyces cerevisiae的高活性的半胱氨酸蛋白酶(cysteinyl protease) Ulp1 (Ubl-specific protease 1,ubiquitin-like protein-specific protease 1)基因片段的重组表达蛋白。本产品200U、1000U和5000U包装，分别可用于约0.4mg、2mg和10mg带有SUMO标签的融合蛋白的酶切。

SUMO是一种泛素样蛋白(Ubiquitin-like Protein)，是一种非常常见蛋白翻译后修饰(post-translation modification,PTM)，对于蛋白的稳定性、生物学功能有重要的调节作用。

SUMO也常被作为一种非常高效和有用的标签用于蛋白的表达纯化，例如百奥莱博的YTB4021 pET-N-His-PreScission-SUMO质粒就是一种在N端同时表达His标签和SUMO标签的原核表达质粒。将SUMO作为标签和目的蛋白的氨基端(N端)进行融合表达时可以改善目的蛋白的折叠，提高目的蛋白的可溶性和产量。随后使用SUMO Protease对SUMO融合蛋白进行酶切，去除SUMO标签就可以获得完全没有标签蛋白干扰的目的蛋白。因此SUMO Protease可以高效且特异性地用于从重组融合蛋白上完全切割去除SUMO标签，从而最大限度地减少了对目的蛋白结构和功能的影响。

SUMO Protease进行酶切时的最适pH值为8.0，最佳酶切温度为30℃。但SUMO Protease在较宽的pH范围(6.0-10.0)在较宽的温度范围(2~30℃)，较宽的离子强度范围(0-400mM NaCl)内均具有较高的酶活性。在实际操作过程中，为尽量保持目的蛋白的结构和生物活性，建议在4℃用SUMO Protease酶切过夜。SUMO Protease在还原剂DTT(0.5~2mM)存在的情况下酶切活性更高，酶切体系中加入适当浓度DTT可以显着提高酶切效率，尤其是在长时间的酶切过程中，例如4℃酶切过夜。

推荐使用带有His/SUMO双标签的百奥莱博研发生产的原核表达质粒pET-N-His-PreScission-SUMO (货号：YTB4021)用于融合蛋白的构建，在使用镍柱纯化介质(GoldBalb His-tag Purification Resin(耐还原螯合型) (YT616)和GoldBalb His-tag Purification Resin(耐变性剂型) (YTB4204))纯化带有His/SUMO双标签的融合蛋白后，使用SUMO Protease可以将His和SUMO标签同时切除，而目的蛋白的N端可以不残留任何额外的氨基酸残基。百奥莱博生产的SUMO Protease因为带有His标签，也可以和融合蛋白的His-SUMO标签一起通过与镍柱结合而非常方便地一起去除。

活性定义：
One unit of SUMO Protease cleaves ≥85% of 2μg control substrate in 1h at 30℃。

SUMO Protease酶活性鉴定结果可参考图1。


图1.百奥莱博SUMO Protease（货号：YTB4022）酶切带有SUMO标签的目的蛋白的效果图。每个样品纯化的SUMO融合蛋白2μg，SUMO Protease的用量从左至右依次为0、0.125、0.25、0.5、1和2U，30℃酶切反应1h后取样进行SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色。图A使用的酶切缓冲液为1X SUMO Protease Buffer + Salt，图B使用的酶切缓冲液为1X SUMO Protease Buffer - Salt。

来源：
通过大肠杆菌重组、表达和纯化而获得，纯度≥95%。

酶储存溶液：
25mM Tris-HCl (pH8.0),250mM NaCl,0.1% Igepal,0.5mM DTT,50% (v/v) glycerol。

10X SUMO Protease Buffer ^-Salt：
500mM Tris-acetate,2% Igepal,10mM DTT,pH8.0 at 25℃。

10X SUMO Protease Buffer ⁺Salt：
500mM Tris-acetate,1.5M NaCl,2% Igepal,10mM DTT,pH8.0 at 25℃。

产品组成：
 

组分	200U	1000U	5000U
SUMO Protease (10U/μl)	20μL	100μL	500μL
10X SUMO Protease Buffer +Salt	400μL	2ml	10ml
10X SUMO Protease Buffer –Salt	400μL	2ml	10ml
说明书	1份	1份	1份

保存条件：-20℃保存，至少一年有效。可将SUMO Protease适当分装后在-80℃长期保存，但须注意避免反复冻融。

注意事项：
 

• 为获得最好的酶切效果，须保证待酶切的重组蛋白为完全纯化的蛋白。


• 对于大部分融合蛋白，SUMO Protease最理想的反应缓冲液液中NaCl的浓度为150mM。根据实际情况可在0~300mM之间调节NaCl的浓度以达到最佳的酶切效果。


• 融合蛋白酶切反应中咪唑的终浓度不应高于150mM，否则可能会影响SUMO Protease的酶切效率。

使用说明：
 

• 酶切条件的优化。由于不同目的蛋白具有不同的特性，所以在实际使用时，建议对酶和待酶切的目的蛋白的比例进行适当优化，以下是一个简单的估计酶用量的实验方案。
   
  • 按下表在1.5ml离心管中配置反应体系(以20μl体系为例，无盐和有盐的缓冲液可任选一种，或两种同时做平行实验)：
     

    成分	用量(μl)
    H2O	X
    10X Reaction Buffer –/+Salt	20
    SUMO-tag Protein (20μg)	Y
    SUMO Protease (10U/μl)	0,0.5 or 1
    Total	200

    
    注：如果带有SUMO标签的目的蛋白浓度为5μg/μl，那么Y = 20/5 = 4，即须使用4μl 5μg/μl的目的蛋白。
  
  
  • 将反应混合物放置于30℃反应1、2、4或6h。如果目的蛋白在30℃不太稳定，可以考虑4℃反应过夜(16h左右)。正常情况下按照上述反应体系，无论30℃反应1h还4℃反应16h，应该都可以充分剪切并去除SUMO标签的。
  
  
  • 带有SUMO标签的目的蛋白酶切反应的温度与时间，可以视情况进行适当调整，具体参考如下表格。
     

    反应温度	反应时间
    4℃	15-16h
    16℃	4h
    25℃	1.5h
    30℃	1h

  
  
  • 取20μL样品进行SDS-PAGE电泳分析，确定反应所需的合适酶量。在实际操作过程中，如果有必要，还可以在上述反应的不同时间点取少量样品，后续通过电泳分析来确定优化的反应时间。
    注：如果目的蛋白要求低温，可将反应体系置于4℃，延长反应时间，并适当增加SUMO Protease用量，以确保酶切效果。


• 酶切与纯化。后续可以按照上述优化的反应条件，放大反应体系进行目的蛋白SUMO标签的切除反应。反应结束后，可以通过镍柱结合去除切除下来的带有His标签的SUMO标签，以及带有His标签的本产品SUMO Protease，从而获得高纯度的去除了SUMO标签的目的蛋白。
   

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货号	名称	规格
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SV0021	AflII限制性内切酶	10KU|2KU|1KU
SV0055	ApoI限制性内切酶	5KU|1KU|500U
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