SARS-CoV-2 E蛋白基因质粒

特别提示：包括SARS-CoV-2 E蛋白基因质粒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：SARS-CoV-2 E蛋白基因质粒
英文名称：SARS-CoV-2 E gene plasmid
产品货号：YTB3024
产品规格：1μg|100μg

的哺乳动物细胞表达质粒，用于表达C端带有Myc标签(EQKLISEEDL)的新冠病毒包膜Envelop蛋白，可以使用抗Myc标签的抗体来识别E蛋白的表达，或进行免疫共沉淀分析等。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达，质粒卡那霉素抗性。转染细胞后，可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。

E蛋白是SARS-CoV-2冠状病毒最小的结构蛋白，仅由75个氨基酸残基组成，主要分布于病毒包膜上。冠状病毒E蛋白包含可以形成同源五聚体的α-螺旋跨膜结构域。该同源五聚体形成的离子通道对离子的选择性较差。E蛋白参与病毒的组装和释放并与病毒的致病性有关，它与M蛋白的相互作用对病毒出芽过程起重要作用。

SARS-CoV-2 E蛋白基因质粒的主要信息如下：
 

Feature Nucleotide	Position
CMV promoter	1-602
T3 promoter and T3 primer binding site	620-639
E protein	677-901
Myc-tag	902-931
Multiple cloning site	935-1001
T7 promoter and T7 primer binding site	1044-1065
SV40 polyA signal	1077-1460
f1 origin of ss-DNA replication	1598-1902
bla promoter	1927-2051
SV40 promoter	2071-2409
Neomycin/kanamycin resistance ORF	2444-3235
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal	3236-3694
pUC origin	3823-4490

SARS-CoV-2 E蛋白基因质粒(4542bp)的图谱如下：


SARS-CoV-2 E蛋白基因质粒的多克隆位点的详细图谱如下：


SARS-CoV-2 E蛋白基因质粒中没有的酶切位点包括：
 

AclI	AflII	AhdI	AleI	AscI	AsiSI	BaeI
BbsI	BbvCI	BcgI	BlpI	BmgBI	Bpu10I	BsgI
BsiWI	BsmBI	BspEI	BspQI	BsrGI	BssHII	BstEII
BstXI	BstZ17I	EcoNI	Esp3I	FseI	NotI	NruI
PflMI	PmeI	PmlI	PpuMI	PshAI	PspXI	SacII
SapI	SbfI	ScaI	SgrAI	SmaI	SrfI	SwaI
TspMI	XcmI	XmaI	XmnI

SARS-CoV-2 E蛋白基因质粒中的单酶切位点包括：
 

AccI	GT`MK,AC	966	KasI	G`GCGC,C	2571
AfeI	AGC|GCT	660	MfeI	C`AATT,G	1324
AgeI	A`CCGG,T	664	MluI	A`CGCG,T	1460
ApaI	G,GGCC`C	999	MscI	TGG|CCA	2654
ApaLI	G`TGCA,C	4176	NarI	GG`CG,CC	2572
AvaI	C`YCGR,G	977	NdeI	CA`TA,TG	240
BamHI	G`GATC,C	935	NheI	G`CTAG,C	597
BclI	T`GATC,A	1231	PaeR7I	C`TCGA,G	977
BglII	A`GATC,T	971	PciI	A`CATG,T	4490
BmtI	G,CTAG`C	601	PflFI	GACN`N,NGTC	2690
BsaI	GGTCTCN`NNNN,	3561	PluTI	G,GCGC`C	2575
BsaXI	,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN`	1624	PspOMI	G`GGCC,C	995
BseRI	GAGGAG(N)8,NN`	2390	PstI	C,TGCA`G	951
BsoBI	C`YCGR,G	977	PvuI	CG,AT`CG	1077
BspDI	AT`CG,AT	2412	RsrII	CG`GWC,CG	3088
BsrDI	GCAATG,NN`	2805	SacI	G,AGCT`C	655
BstBI	TT`CG,AA	3254	SalI	G`TCGA,C	965
BtsI	GCAGTG,NN`	1413	SfiI	GGCCN,NNN`NGGCC	2347
ClaI	AT`CG,AT	2412	SfoI	GGC|GCC	2573
CspCI	,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN`	382	SnaBI	TAC|GTA	346
DraIII	CAC,NNN`GTG	1690	SpeI	A`CTAG,T	989
EagI	C`GGCC,G	2478	StuI	AGG|CCT	2393
Eco53kI	GAG|CTC	653	Tth111I	GACN`N,NGTC	2690
EcoRV	GAT|ATC	961	XhoI	C`TCGA,G	977
HindIII	A`AGCT,T	941

SARS-CoV-2 E蛋白基因质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
primer (620-639):5"-AATTAACCCTCACTAAAGGG-3"
primer(1044-1065):5"-GTAATACGACTCACTATAGGGC- 3"

使用说明：
1．首次使用1μg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2．100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl，共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。

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规格：10*100μL
 BL21 Star(DE3)感受态细胞来源于BL21(DE3)菌株，由特殊工艺制作，使用pUC19质粒检测本产品，转化效率可达10cfu/μg。
 BL21 Star(DE3)菌株的特点是含有rne131基因突变体。rne131突变基因能够增强菌株细胞内mRNA的稳定性，从而有效提高蛋白表达能力。本产品主要适用于T7启动子表达载体(如pET 系列)的高水平蛋白表达。
 菌株基因型为：F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm rne131(DE3)。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、LB培养基等。

使用方法：
1.从-80℃冰箱中取出感受态细胞，置于冰上解冻。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。以下实验以100μL感受态细胞为例。
2. 取 100μL冰上融化的BL21 Star(DE3)感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。
3. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
4. 向离心管中加入700μL不含抗生素的无菌培养基(LB)，混匀后37℃，200rpm 复苏60分钟。
5. 取100μL左右菌液涂布于含相应抗生素的LB培养基上。如果转化高浓度的质粒，可以减少涂布的量。
6. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

名称：IPTG溶液
货号：BTN80909
规格：1.5mL
本产品为浓度为200mg/mL的无色液体。IPTG是β-半乳糖苷酶的活性诱导物质。基于这个特性，当pUC系列的载体DNA(或其他带有lacZ基因载体DNA)以lacZ缺失细胞为宿主进行转化时，或用M13噬菌体的载体DNA进行转染时，如果在平板培养基中加入X-Gal和IPTG，由于β-半乳糖苷酶的α-互补性，可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑选出基因重组体。此外，它还可以作为具有lac或tac等启动子的表达载体的表达诱导物使用。

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

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