Benzonase核酸酶残留检测试剂盒

特别提示：包括Benzonase核酸酶残留检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Benzonase核酸酶残留检测试剂盒
英文名称：Benzonase Nuclease detection kit
产品货号：MT0181
产品规格：50T

Benzonase核酸酶可高效降解任何形式的核酸，广泛用于蛋白等生物制品中核酸的去除。在处理过的生物制品中，可能存在微量Benzonase残留，这些微量残留会对后续生物制品的应用造成一定的影响。生物制品中Benzonase的残留量是衡量生物制品质量的重要指标之一。目前，Benzonase核酸酶残留检测多基于免疫吸附ELISA的检测方法，由于其方法自身的限制，测量并不准确，主要体现在以下方面：
1．检测抗体的亲和性能差异大，受环境影响大；
2．检测抗体的非特异性交叉反应；
3．生物制品本身蛋白浓度差异，造成的亲和吸附差异。

本试剂盒基于荧光探针的Benzonase核酸酶残留检测方案，成功避开以上缺点，实现了高重复性、高准确度、高灵敏度检测。在无Benzonase核酸酶的样品中，该探针是稳定存在的，不会产生荧光信号；含有核酸酶残留的样品中，核酸酶可将荧光标记的DNA探针切割，从而产生逐渐增强的荧光信号。该方法可检测1.5~50ng/ml的核酸酶残留，操作简单，只需加入Benz Detection Solution和待检样品，在定量PCR仪上15min内即高准确度完成检测。该制品仅限用于我公司的Benzonase核酸酶（MT0068、MT0169、MT0170、MT0171）检测，其它Benzonase核酸酶制品，可能不适用，无法提供数据支持。

试剂盒组成：
 

组分	规格
2×Benz Detection Solution	1ml
标准品A（25ng/ml）	100μl
标准品B（12.5ng/ml）	100μl
标准品C（6.3ng/ml）	100μl
标准品D（3.1ng/ml）	100μl
标准品E（1.5ng/ml）	100μl
样品稀释液	1.5ml

储存：置于-20℃，可保存6个月，-80℃可保存18个月。

使用方法：

一、准备工作
 

• 由于Benzonase核酸酶消化迅速，在进行检测操作前务必将定量PCR仪的程序、样品编号提前设置完毕，检测操作完成后立即上机检测。
• 所有试剂，室温融化待用，实验完成后所有试剂再放置于-20℃或-80℃保存。

二、检测操作
 

• 样品准备
  首次检测，可将待检测样品用样品稀释液稀释2倍、5倍、10倍后备用。稀释倍数取决于样本中Benzonase核酸酶的残留水平。
• 荧光定量PCR仪设置
   

  关掉定量PCR仪的热盖功能，反应体积40μl。
  Step 1	37℃ 10s		40 cycles
  Step 2	37℃ 20s	FAM通道收集信号

  
  定量PCR仪的热盖功能设置，不同机型可能不同，如不熟
  悉设置功能，可联系设备供应商询问。
• 加样操作
   
  • 在每一个0.2ml EP管底部（建议采用8联管或96孔板）加入20μl标准品或待检测样品（见实验排表1）。
  • 所用样品加完后，快速的在每个样品中加入20μl 2×Benz Detection Solution，盖上管盖或膜。手腕用力将样品甩至管底。（本步操作请尽可能快，通常45s内完成，缓慢的操作，将影响检测结果准确性），然后迅速将检测样品放置PCR仪上运行。
    表1：实验操作工作表
     

    管号	用途	用量	用途
    管1	样品稀释液	20μl	阴性对照
    管2	标准品A（25ng/ml）	20μl	标准曲线
    管3	标准品B（12.5ng/ml）	20μl	标准曲线
    管4	标准品C（6.3ng/ml）	20μl	标准曲线
    管5	标准品D（3.1ng/ml）	20μl	标准曲线
    管6	标准品E（1.5ng/ml）	20μl	标准曲线
    管7	检测样品原液	20μl	浓度测定
    管8	检测样品稀释2倍产物	20μl	浓度测定
    管9	检测样品稀释5倍产物	20μl	浓度测定
    管10	检测样品稀释10倍产物	20μl	浓度测定

三、数据处理
 

• 读取荧光信号值
  该方案不同于标准定量PCR的数据处理方法，并不是去读取相同荧光值下的Ct值，而是读取在固定时间点的荧光信号（对数形式）。通常可读取5min（Ct10）~10min（Ct30）之内的数值，通常读取8min时间点的荧光信号值，即Ct16的荧光信号值。以下为使用BioRad-Opticon2机型进行检测的结果。
  
  表2：检测结果
   

  管号	用途	荧光值
  管1	样品稀释液	----
  管2	标准品A（25ng/ml）	0.553
  管3	标准品B（12.5ng/ml）	0.37
  管4	标准品C（6.3ng/ml）	0.221
  管5	标准品D（3.1ng/ml）	0.09
  管6	标准品E（1.5ng/ml）	0.041
  管7	检测样品	X

• 根据标准品荧光信号值制作标准曲线
  采用Excel进行标准曲线制作，采用幂函数，X轴为荧光信号值，Y轴为标准品浓度。
  
• 计算检测样本中Benzonase含量
  根据标准曲线中的计算公式，将检测样品的荧光值(x轴)换算成Benzonase核酸酶残留量（ng/ml，y轴）。
  Benzonase含量(y)=稀释倍数×1.6897e^5.1296x

数据处理中的注意事项：
 

• 通常样本中Benzonase核酸酶残留量低于标准品F(1.5ng/ml)时，无法检出。报告形式为Benzonase核酸酶残留量<1.5ng/ml。
• 检测样品稀释后产物的荧光值仍然高于标准品A（25ng/ml）的荧光信号值，则需要将样本继续稀释后再进行检测。
• 不同的荧光PCR机型，可能在数据表现形式上存在差异，但原则不变，原理为短时间内的荧光增加量代表Benzonase核酸酶含量。
• 如果您对数据处理比较疑惑，可将结果发送至我处，有我处协助数据处理。

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