LAMP恒温扩增试剂盒(浊度法)

特别提示：包括LAMP恒温扩增试剂盒(浊度法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：LAMP恒温扩增试剂盒(浊度法)
英文名称：LAMP Kit(Turbidity)
产品货号：MT0134
产品规格：50T|200T

本试剂盒采用恒温扩增技术(LAMP)，加入用户准备好的特异性引物及模板DNA，65℃反应45min即可完成扩增，根据浊度变化可判断扩增发生与否。其原理是在LAMP的高效反应过程中会产生大量的焦磷酸根离子，其与镁离子结合形成焦磷酸镁白色沉淀，因此在实验过程中可通过浊度仪检测反应液的浊度变化进行实时定量检测。也可在反应结束后肉眼直接观察焦磷酸镁沉淀，根据是否形成白色沉淀来判断反应是否发生。

LAMP是一种新型核酸扩增技术，采用4或6条能够识别目的基因上的6个特异区域的引物，依赖与Bst DNA聚合酶的强链置换活性，在30～60分钟内DNA扩增可达10⁹～10¹⁰倍。

试剂盒特点：
检测方便：LAMP-浊度扩增反应，既可肉眼观察，亦可通过浊度仪定量检测。
操作简单：一步反应30～60min即可完成。
特异性高：六条特异性引物，保证了产物的特异性和检测的可靠性。
仪器简单：只需维持恒温的水浴锅。
灵敏度高：能从极低拷贝中扩增靶基因。
应用广泛：通用型LAMP检测试剂盒，广泛适用于微生物致病菌检测和疫病检测。

试剂盒组成：
 

名称	50T	200T
2×Turbidity LAMP Mix	0.65ml	1.25ml×2
5M Betain	1ml	1ml×4
Bst DNA Polymerase 2.0	50μl	200μl

储存：-20℃可保存3年，避免反复冻融。

应用实例：

应用本试剂盒对不同模板量样本进行浊度扩增，65℃，45min，结果如下图。泳道1-6模板量分别为0.01ng、0.05ng、0.2ng、1ng、5ng、20ng，C为对照（不加模板）。

使用方法：
1．按以下组分配置反应混合液
 

成分	用量
2×Turbidity LAMP Mix	12.5μL
10×LAMP Primer Mix	2.5μL
5M Betain	0～4μL
模板DNA	XμL
Bst DNA Polymerase 2.0	1μL
ddH2O	Up to 25μL

2．反应体系配好后，充分混匀并短暂离心，置于60～68℃进行反应，连接LAMP实时浊度仪，对浊度变化进行实时检测。也可肉眼分别于30min、45min、60min观察浊度变化。必要情况下85℃热失活5min（可选）。

LAMP实验的条件优化

1．10×LAMP Primer Mix配置
 

	浓度	首次实验浓度	引物储液浓度
FIP	8～16μM	8,12,16μM	100μM
BIP	8～16μM	8,12,16μM	100μM
Loop F	2～8μM	2,4,8μM	100μM
Loop R	2～8μM	2,4,8μM	100μM
F3	0.5～2μM	0.5,1,2μM	100μM
B3	0.5～2μM	0.5,1,2μM	100μM

2．Betain使用浓度
 

测试浓度	5M Betain 25μl体系添加量
0M	0μL
0.25M	1.25μL
0.4M	2μL
0.6M	3μL
0.8M	4μL

3．Turbidity LAMP对照设置
 

	浊度对照	阴性对照	实验样品
ddH2O	√
Turbidity LAMP Mix	√
LAMP Primer Mix	√
5M Betain	可选
模板DNA	√	×	√
Bst酶2.0	×	√	√

4．反应温度设置
通常反应温度为65℃，由于引物的效率差异，可在60、63、65、68℃进行适当调整。首次实验建议采用60、65℃

注意事项：
1．为了减少交叉污染，请分区操作（试剂和模板DNA的配置操作最好在不同区域中进行）。
2．实验时，所需模板量取决与样品类型（0.1～100ng），可先进行预实验确定模板量。
3．各区物品均为专用，不可交叉使用，防止污染。
4．实验过程中应穿工作服，带手套，建议使用带滤芯的一次性吸嘴。

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