SARS-CoV-2 S蛋白基因质粒

特别提示：包括SARS-CoV-2 S蛋白基因质粒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：SARS-CoV-2 S蛋白基因质粒
英文名称：SARS-CoV-2 S gene plasmid
产品货号：YTB3021
产品规格：1μg|100μg

SARS-CoV-2 S基因质粒是我公司推出的哺乳动物细胞表达质粒，用于表达C端带有Myc标签(EQKLISEEDL)的SARS-CoV-2 Spike蛋白，可以使用抗Myc标签的抗体来识别Spike蛋白的表达，或进行免疫共沉淀分析等。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达，质粒为氨苄青霉素抗性。

Spike蛋白(S蛋白)是冠状病毒的四个结构蛋白之一，为细胞表面糖蛋白，由Spike基因编码，以同源三聚体的形式存在于冠状病毒刺突上，参与受体识别和膜融合等病毒感染过程。在结构上，Spike蛋白分为三个主要结构域：胞外区、跨膜区和胞内区，其中胞外区包括S1，S2两个结构域，S1结构域位于Spike蛋白N端，含有RBD，SARS-CoV-2通过RBD与ACE2的肽酶结构域结合，参与SARS-CoV-2病毒的感染。SARS-CoV-2 Spike蛋白与ACE2的亲和常数大约为15nM，是SARS-CoV Spike蛋白与ACE2的亲和常数的10-20倍；S2结构域位于Spike蛋白的C端，由一段融合肽段与两个疏水螺旋重复区(HR1，HR2)组成，参与病毒感染的膜融合过程。Spike蛋白是冠状病毒疫苗、治疗性抗体和诊断方法的关键靶标。

SARS-CoV-2 S基因质粒的主要信息如下：
 

Feature Nucleotide	Position
CMV promoter	232-819
T7 promoter and T7 primer binding site	863-882
Multiple cloning site	895-922
Spike protein	923-4741
Myc-tag	4742-4771
BGH pA	4812-5042
f1 origin of ss-DNA replication	5088-5516
SV40 promoter	5521-5864
Neomycin resistance ORF	5926-6720
SV40 polyA signal	6894-7024
pUC origin	7407-8077
Ampicillin resistance ORF	8222-9218
bla promoter	9117-9123

SARS-CoV-2 S基因质粒图谱如下：


SARS-CoV-2 S基因质粒单酶切位点包括：
 

Acc65I	G`GTAC,C	917	KpnI	G,GTAC`C	921
AflII	C`TTAA,G	908	MfeI	C`AATT,G	161
AhdI	GACNN,N`NNGTC	8295	MluI	A`CGCG,T	228
AleI	CACNN|NNGTG	4283	NarI	GG`CG,CC	6054
ApaI	G,GGCC`C	4791	NheI	G`CTAG,C	895
BamHI	G`GATC,C	4673	NruI	TCG|CGA	208
BcgI	,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN`	8800	PaeR7I	C`TCGA,G	4775
BmgBI	CAC|GTC	3869	PluTI	G,GCGC`C	6057
BmtI	G,CTAG`C	899	PshAI	GACNN|NNGTC	4121
Bpu10I	CC`TNA,GC	180	PspOMI	G`GGCC,C	4787
BspDI	AT`CG,AT	4515	PspXI	VC`TCGA,GB	4775
BssHII	G`CGCG,C	6451	PvuI	CG,AT`CG	8665
BstEII	G`GTNAC,C	2432	RsrII	CG`GWC,CG	6570
BstZ17	GTA|TAC	7026	SacI	G,AGCT`C	818
Bsu36I	CC`TNA,GG	1572	SfoI	GGC|GCC	6055
ClaI	AT`CG,AT	4515	SmaI	CCC|GGG	5867
EagI	C`GGCC,G	5960	SnaBI	TAC|GTA	590
Eco53kI	GAG|CTC	816	StuI	AGG|CCT	5843
EcoO109I	RG`GNC,CY	4787	SwaI	ATTT|AAAT	4500
EcoRI	G`AATT,C	2230	TspMI	C`CCGG,G	5865
EcoRV	GAT|ATC	3859	XbaI	T`CTAG,A	4781
HpaI	GTT|AAC	2767	XhoI	C`TCGA,G	4775
KasI	G`GCGC,C	6053	XmaI	C`CCGG,G	5865

SARS-CoV-2 S基因质粒推荐使用的测序引物序列如下：
primer (829-848):5"- CTAGAGAACCCACTGCTTAC -3"
primer (4812-4829):5"- TAGAAGGCACAGTCGAGG -3"

使用说明：
1．首次使用1μg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2．100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl，共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。

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货号：BTN60105
规格：50次
本产品利用Taq DNA polymerase的不依赖于模板的末端转移酶活性，在只有dATP 存在的情况下，在平末端的DNA片段加上一个dA 尾巴，使平末端片段也能被T载体克隆。其流程图如下：


产品特点：
1. 简单，2×Tailing Buffer中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。
2.适用于任何平末端的DNA片段，包括Pfu DNA polymerase等酶合成的DNA片段。
3.产物可以直接用于与T载体的连接。

试剂盒组成：
 

成分	规格
Taq DNA polymerase(5U/μL)	50μl
2×Tailing Buffer	1.25ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：反应前纯化处理：
用Vent，Deep Vent，Pfu，Pwo等具有3 到5外切活性的DNA聚合酶扩增得到的DNA片段，必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程(如酚/lǜ仿抽提或Proteinase K处理)，否则它们将在加A反应时，切除掉加上的A尾巴，干扰反应。可以采取胶回收和酚/lǜ仿抽提法等常规方法纯化，最后溶解在水或TE中，终浓度以0.1μg/μL为宜。
二：加A反应
在干净的0.5mL或1.5mL离心管中，分别加入下列成分：
 

回收的DNA片段	0.2-2ug
2×dA Tailing Buffer	25μL
Taq DNA polymerase(5U/μL)	1μL
补水到	50μL
72℃保温2小时

三：反应后处理
加A反应后，Taq DNA pol

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