特别提示:包括钙黄绿素溶液(1mM)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:钙黄绿素溶液(1mM)
产品货号:BTN180806
产品规格:1mL
产品及特点:
本产品可用作LAMP可见光染料成分之一使用,它具有下列特点:
1、操作简单,即开即用。
2、产品经过灭菌,可长期保存。
保存条件:
低温运输,-20℃保存,有效期为1年。
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名称:PCR抑制物清除剂
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规格:1mL
用血液、土壤、植物、中药材等样品中提取的DNA 经常含有会抑制PCR的产物。本产品专门用于解除这些PCR 抑制剂的抑制作用,使DNA 能够用于PCR扩增。
产品特点:
1. 使用简单,直接加入PCR反应体系中使用。
2.适用范围广,可以用于解除血液、土壤、植物、中药材等DNA样品中的PCR 抑制剂。
低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:将本产品按1:10的比例加入到PCR反应体系中即可进行PCR,如果PCR反应体系为50μL,则需要加本产品5μL。
名称:5M甜菜碱溶液,PCR级
货号:BTN70902
规格:1.5mL
本产品为浓度为5M的甜菜碱的水溶液,可以直接加入到PCR反应或测序反应中提高扩增或测序的效率,其详细的用途包括:
1. 降低富含GC的模板形成二级结构的可能,有助于富含GC的模板的PCR扩增和测序。
2. 降低变性温度对碱基的依赖性。
3. 提高LA-PCR的扩增效率。
4. 提高Taq DNA聚合酶的稳定性。
储存条件:低温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:将本产品加入PCR反应体系中,使其终浓度在1.0-1.7M之间即可。其他按常规操作进行即可。
名称:两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)
货号:BTN80206
规格:50次
本试剂盒是整合cDNA第一链合成试剂和即用型PCR 试剂而得的RT-PCR试剂盒。cDNA第一链合成反应和PCR反应分别在两个离心管中进行。
产品特点:
1. 即开即用,足够50次RT反应(20μL体系)和600次PCR反应(30μL体系)。
2. cDNA第一链合成试剂盒可灵活选用随机引物、Oligo dT引物或基因专一引物,适合各种情况。
3. PCR试剂盒具有即用、简单等优点,PCR mix中含上样染料,所以PCR产物可以直接上样电泳。
4. 两管式操作,RT和PCR在不同试管中进行,便于单独优化RT反应或PCR反应条件。
5.扩增效率高,最长可扩增5Kbp以上的RNA。
试剂盒组成:
成分 |
规格 |
MMLV 逆转录酶(含RI) |
100μl |
RT Buffer(含dNTP) |
300μl |
Oligo(dT)18引物(0.5μg/μL) |
50μl |
随机引物(0.2μg/μL) |
50μl |
RNase-free 水 |
10ml |
PCR MagicMix 3.0 |
9ml |
专用染料 |
360μl |
说明书 |
1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
一、
样品RNA的制备(本试剂盒不提供相关试剂)
1、可用自本公司各种RNA提取方法提取样品的RNA,也可以选用其他供应商的产品,但得到的RNA一定要溶解在RNase-free的超纯水中。
二:
RT(逆转录)反应合成cDNA
1. 按下表配制RT反应体系(20μl体系):
RNA模板 |
总RNA |
100-500ng |
或poly(A)mRNA |
10-500 ng |
或专一的RNA(如体外转录制备的) |
0.01pg-500ng |
引物 |
Oligo(dT)18(0.5μg/μL) |
1μL |
或随机引物(0.2μg/μL) |
1μL |
或自备模板专一反向引物(10pmol/μL) |
1-2μL |
RNase-free水 |
补水到12μL |
注意:RNA样品不能含有基因组DNA污染。随机引物与RNA 模板的比例将决定cDNA 合成的平均长度(成反比)。一般情况下随机引物效率好于OligodT引物,但如果只想转录总RNA中的mRNA(只占5%左右),则可优先选用OligodT引物,这样就可以排除非mRNA的干扰。
2. 70℃保温5分钟变性模板后立即冰浴。
3. 按顺序加入6μL RT Buffer(含dNTP)和2μL MMLV 逆转录酶(含RI),反应终体积为20μl。
4. 42℃保温60分钟。此步为RT反应。
5. 70℃保温10分钟以终止反应,然后放置在冰上待用。
6. 合成的cDNA可以直接作为PCR 模板使用,不需要纯化。剩余样品可以放置在-20℃长期保存。
三、
PCR(30μL体系)
1、将全部专用染料加入到PCR MagicMix 3.0中,轻柔颠倒混匀即可使用。未用完的部分需要在-20℃。也可以不加专用染料,但在PCR结束后,电泳上样前,则需要加入电泳上样液,否则电泳时没法判断电泳速度。
2、在PCR 管中加入下列成分:
成份 |
加入量 |
PCR MagicMix 3.0(已加染料) |
15μl |
cDNA样品(上步的RT反应液) |
1-5μl |
模板专一性正向引物(10 pmol/μL) |
1-2μl |
模板专一性反向引物(10 pmol/μL) |
1-2μl |
补水到 |
30μl |
注意:cDNA 也可以稀释后用作PCR 模板。是否稀释或稀释多少倍完全取决于靶基因的丰度。
3、PCR反应参数(需要根据模板和引物决定,下面的只做参考):
过程 |
温度 |
时间 |
预变性 |
94℃ |
5min |
PCR反应(35个循环) |
94℃ |
1min |
55℃ |
1min |
72℃ |
2min |
最后延伸 |
72℃ |
10min |
四、
电泳检测
取5-0μl PCR产物直接在PAGE或琼脂糖凝胶上电泳,跟分子量标准比较估计出扩增产物的大小。
注:本试剂盒中的PCR mix含有甘油和染料,可以直接上样,不需要额外再加电泳上样液。
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