非洲猪瘟LAMP检测试剂盒

特别提示：包括非洲猪瘟LAMP检测试剂盒(OTG可视染料法,冻干制剂)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：非洲猪瘟LAMP检测试剂盒(OTG可视染料法,冻干制剂)
英文名称：Lyophilized ASFV LAMP Kit(Visual OTG Dye)
产品货号：MT015101
产品规格：48T

本试剂盒基于LAMP技术，用于定性检测样品中的非洲猪瘟病毒，检测灵敏度为10个拷贝，本试剂盒主要组分为冻干制品，可常温运输不影响试剂盒性能。

LAMP是一种新型核酸扩增技术，采用4或6条能够识别目的基因上的6个特异区域的引物，依赖于Bst DNA聚合酶的强链置换活性，在30～60分钟内DNA扩增可达10⁹～10¹⁰倍。本试剂盒为冻干制品，相对于液体型产品更加稳定，灵敏度更高，操作更加方便，通常在30min内完成检测。

本试剂盒配有橙绿变色染料OTG，以冻干的形式预加在8联管盖上。在LAMP反应完毕后（在反应完毕前，务必不能将管盖上染料混入反应液中），将0.2ml EP管颠倒溶解OTG染料后。LAMP的反应产物将与OTG染料形成强烈的绿色肉眼可见变色反应（阳性），而未发生扩增的EP管为深橙色（阴性）。

试剂盒组成：
 

组分	规格(48T)
LAMP OTG Reagent	1瓶
LAMP Buffer	0.75ml
0.2ml EP管	48支
含冻干OTG染料EP管盖	48支
ASFV LAMP Primer	1支
ddH2O	1mL
ASFV阳性标准品（105 Copy/μl）	1支

保存条件：-20℃

使用方法：
 

• LAMP OTG Reagent为干粉形式，包含Bst DNA聚合酶4.0、dNTP等，在未溶解前，该制品可-20℃长期保存，并可室温运输，性能无下降。使用前每瓶用0.75ml的LAMP Buffer溶解后，可立即使用，剩余试剂可在-20℃保存1个月，在-60℃以下长期保存。
• OTG染料已经预先加入在EP管盖上，为干粉形式，其牢固的结合在管盖上，仅有反应完毕后，将EP管倒置后才能将其溶解，溶解后其将立即终止LAMP反应，并与LAMP反应产物形成鲜亮的绿色可见光。在配制反应液和反应过程中务必不能将EP管盖上的染料混入反应液中，否则会导致LAMP反应终止。
• ASFV LAMP Primer为干粉形式，该制品可-20℃长期保存，并可室温运输，性能无下降。使用前每瓶用0.2ml的ddH2O溶解后，可立即使用，剩余试剂可在-20℃保存1个月，在-60℃以下长期保存。
• 阳性标准品为干粉形式，首次使用前加入100μl的ddH2O，漩涡10s溶解后，保存于-20℃。溶解后的制品浓度为105copy/μl，每次实验时采用1μl即可。
• 配制反应体系
  在本试剂盒提供的0.2ml EP反应管中加入下述试剂
   

  成分	用量
  溶解后的LAMP OTG Reagent	15μL
  溶解后的ASFV LAMP Primer	4μL
  模板DNA	1μL

  
  全部试剂加入完毕后，轻弹EP管底部后，再盖上含OTG染料的EP管盖（盖上管盖后务必不能再剧烈混合与倒置，以防止将管盖上的OTG染料溶解，OTG染料一旦混入反应液中将会终止LAMP反应）。
• 反应体系配好后，置于60℃反应25min。
• 观察结果：观察结果时，尽可能不要与配制反应空间共用，以防止污染操作台。将反应EP管倒置，并手腕轻甩，反应液浸泡EP管盖上的OTG染料，静置30s。再将EP反应管正置，并轻甩反应液到EP管底部，此时扩增样品将变为鲜艳肉眼可见绿色，而阴性未发生扩增的管将为深橙色。（在LAMP反应结束后禁止将反应管盖打开，否则可能会导致气溶胶污染）。一旦发生气溶胶污染，请使用我公司的DNA污染去除剂（货号：MT3001）进行
  环境清理。
• 结果判读
   
  • 结果判读成立条件
    阴性水对照为深橙色、阳性标准品变为鲜艳的绿色条件下，结果判读有效。
  • 阳性结果判读
    阳性样品为鲜艳的绿色。
  • 阴性结果判读
    阴性样品为深橙色。
    该试剂盒稳定的检测灵敏度为5 copy。

根据您的关注的非洲猪瘟LAMP检测试剂盒(OTG可视染料法,冻干制剂)，非洲猪瘟LAMP试剂盒，非洲猪瘟检测试剂盒，ASFV检测试剂盒，您可能还对以下产品有需求：



名称：禽流感病毒H1亚型(AIV-H1)单重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA381
规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对禽流感病毒H1亚型特异性引物，结合特异性荧光探针，用一步法荧光RT-PCR技术对禽流感病毒H1亚型RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中禽流感病毒H1亚型的探针报告基团为FAM。

二、用途：
本试剂盒适用于鼻咽提取物、鼻咽拭子、支气管肺泡灌洗液等临床样品中禽流感病毒H1亚型的特异性检测。适用于禽流感病毒H1亚型感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
H1荧光qRT-PCR反应液(H1-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照 (NTC) 1管 50μL/管
阳性对照 (H1-PTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二胺四乙酸二钠)或柠檬酸钠抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500µL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中，6000rpm离心20s，取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的(货号：EAR002)RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(H1-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(H1-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(H1-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明H1核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明H1核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行H1 qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明H1核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


关注非洲猪瘟LAMP检测试剂盒(OTG可视染料法,冻干制剂)，非洲猪瘟LAMP试剂盒，非洲猪瘟检测试剂盒，ASFV检测试剂盒的同时，为您推荐更多您可能感兴趣的产品：


SYA352 禽传染性法氏囊病病毒(IBDV)单重荧光PCR检测试剂盒 48次/盒|96次/盒
SYA360 禽马立克氏病病毒(MDV)单重荧光PCR检测试剂盒 48次/盒|96次/盒
SYA461 SARS病毒(SARS)单重荧光PCR检测试剂盒 48次/盒
BTN13-32410 双芽巴贝斯虫PCR试剂盒 50次
BTN13-82000 脑胞内原虫属PCR试剂盒 50次
BTN14-42421 蓝氏贾第鞭毛虫A型荧光定量PCR试剂盒(染料法) 50次
BTN14-78300 红色猪圆线虫荧光定量PCR试剂盒(染料法) 50次
BTN13-2760 来檬丛枝植原体PCR试剂盒 50次

北京百奥莱博科技有限公司一家专注于生命科学研究领域的生物技术公司，坚持“质量至上，服务为本，全心全意助力生命科学”的理念，为广大用于提供稳定、可靠、专业的产品和服务支持，产品线包括分子生物学，细胞生物学，免疫检测，抗体，重组蛋白，血液制品等系列。“忙忙碌碌的平凡，铸就事业的不凡”。让我们携起手来，共同创造生命科学的蓬勃发展。