2×GoldStar MasterMix

特别提示：包括2×GoldStar MasterMix在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：2×GoldStar MasterMix
英文名称：2×GoldStar MasterMix
产品货号：WE0420
产品规格：5mL|25mL

2×GoldStar MasterMix是由GoldStar DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，预混好的PCR混合液使操作更加简单快捷，可最大限度地减少人为误差和污染。该产品所含有的GoldStar DNA Poly- merase是一种经化学修饰的、全新高效Taq DNA Polymerase，在常温下酶的活性被完全封闭，使得该酶在低温或常温下没有活性，从而有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的缓冲体系使酶的应用更为广泛，使GC含量高、二级结构复杂以及低拷贝的模板，均能高效扩增。特有的MasterMix配方使整个反应体系稳定性更强。用本品进行PCR扩增，PCR产物3"末端附有一个“A”碱基，可直接用于T/A克隆。本品不含染料，PCR程序结束后可根据需要加入适量上样缓冲液后进行电泳操作。本产品特异性强，PCR扩增后无需胶回收去除杂带，可直接用于下游克隆或芯片杂交等实验。主要应用于常规的PCR、RT-PCR、多重PCR和基因芯片检测，特别适用于对特异性要求较高的PCR反
应。
产品组成：
 

 

组份	5mL	25mL
2×GoldStar MasterMix	5×1mL	5×5mL
ddH2O	5×1mL	5×5mL

【注】：
● 2×GoldStar Taq MasterMix含有GoldStar DNA Polymerase,3.4mM MgCl2和400μM each dNTP。

保存条件：-20℃

质量控制：
1、经检测无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残留DNA；
3、能有效扩增人基因组中的单拷贝基因；
4、2-8℃存放三个月，无明显活性改变。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
 

试剂	50μL反应体系	终浓度
2×GoldStar Mast erMix	25μL	1×
Forward Primer，10μM	2μL	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μL	0.4μM
Template DNA	＜0.5μg	＜0.5μg/50μL
ddH2O	Up to 50μL

【注】：
● 引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10min
变性	94℃	30 s	30-40个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	60 s
终延伸	72℃	5min

【注】：
● 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为30-60 s，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
● 延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品中所包含的GoldStar DNA Polymerase的扩增效率为1-2 kb/min。
● 可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
● 本产品须在预变性95℃，10min条件下实现酶的活化。

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名称：硫酸镁溶液(PCR级MgSO4溶液)
货号：BTN130840
规格：5mL
本产品为专门用于PCR的MgSO4溶液，浓度10mM，可以用于调节MgSO4的最佳浓度。MgSO4为常用的PCR增强剂之一。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

名称：Taq DNA聚合酶
货号：WE0101
规格：500U|2500U|10000U
Taq DNA Polymerase是通过大肠杆菌表达纯化的重组酶。其基因来源于Thermus aquaticus polymerase。该蛋白分子量为94kDa，具有5"→3"DNA聚合酶活性和5"→3"外切核酸酶活性，无3"→5"外切核酸酶活性，扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。本产品具有延伸速度快、扩增效率高的特点，主要适用于PCR法扩增DNA片段、DNA序列测定等实验。

产品组成：
 

组份	500U	2500U	10000U
Taq DNA Polymerase(5U/μL)	100μL	5×100μL	2×1ml
10×PCR Buffer	1.8ml	5×1.8ml	8×5ml

【注】：
● 本产品的10×PCR Buffer中含有15mM镁离子。

活性定义：
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制：
1、经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；
2、经检测无外源核酸酶活性；
3、PCR方法检测无宿主残余DNA；
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；
5、室温存放一个月，无明显活性改变。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系(50μL)：
 

成分	用量	终浓度
10×PCR Buffer	5μL	1×
dNTP Mix，10mM each	1μL	200μM each
Forward Primer，10μM	2μL	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μL	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μL
Taq DNA Polymerase	0.25-0.5μL	1.25-2.5U/50μL
ddH2O	up to 50μL

【注】：
● 引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2、PCR反应条件:
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2min	1
变性	94℃	30s	25-35个循环
退火	55-65℃	30s
延伸	72℃	30s
终延伸	72℃	2min	1

【注】：
● 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
● 延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
● 可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

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