去乙酰化酶抑制剂混合物

特别提示：包括去乙酰化酶抑制剂混合物在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：去乙酰化酶抑制剂混合物
英文名称：Deacetylase Inhibitor Cocktail, 100X
产品货号：YTB4030
产品规格：1ml|5ml

本制品是一种用于维持组蛋白和其它非组蛋白乙酰化状态的去乙酰化酶抑制剂混合物。

本制品含40μM Trichostatin A,1mM EX-527,400mM nicotinamide和200mM sodium butyrate，配制在含适量水的DMSO中。

本制品使用便捷，通常以1:100的比例把去乙酰化酶抑制剂混合物加入裂解液或细胞培养液中即可直接使用。一个1ml包装的本产品通常足够用于100ml的裂解液或细胞培养液的配制。

细胞或组织等提取物中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶、去乙酰化酶等，容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰，从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物中添加适当的蛋白酶、磷酸酶、去乙酰化酶等抑制剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。为更好地检测细胞内蛋白的乙酰化水平，可在细胞培养液中添加去乙酰化酶抑制剂一段时间后再收集细胞。本去乙酰化酶抑制剂混合物可以有效抑制各类去乙酰化酶(包括class I/II/III HDAC)对蛋白的去乙酰化作用，保持蛋白乙酰化状态。

产品组成：
 

组分	1ml	5ml
去乙酰化酶抑制剂混合物(100X)	1ml	1ml×5
说明书	1份	1份

保存条件：-20℃保存，一年有效。

注意事项：
本制品可以适当分装后保存，并应在临使用前添加到裂解液等适当溶液中。
本制品中含有的去乙酰化酶抑制剂对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
本制品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
本去乙酰化酶抑制剂混合物为100X的储存液，使用时按照1:100的比例加入到裂解液或培养液中(例如，1ml裂解液或培养液中加入10μl去乙酰化酶抑制剂混合物)，混匀后即可使用。含有去乙酰化酶抑制剂混合物的裂解液或培养液宜现用现配，不宜配制后冻存待后续使用。

其他说明：
本制品可以有效抑制各种去乙酰化酶，包括class I/II/III去乙酰化酶等。曲古菌素A(Trichostatin A)是class I/II去乙酰化酶可逆抑制剂；EX-527是SIRT1的选择性可逆抑制剂，对SIRT2和SIRT3也有一定的抑制作用；烟酰胺(nicotinamide)是class III去乙酰化酶(Sirtuins，即SIRT1-7)可逆抑制剂；丁酸钠(sodium butyrate)是class I/II去乙酰化酶可逆抑制剂。各种抑制剂的具体信息请参考附表2。

附表2.常用蛋白酶、磷酸酶、去乙酰化酶抑制剂的具体相关信息：
 

名称	分子量	目标酶家族	抑制类型
AEBSF	239.5	丝氨酸蛋白酶	不可逆
Aprotinin	6511.5	丝氨酸蛋白酶	可逆
Bestatin	308.38	氨基肽酶	可逆
E64	357.4	半胱氨酸蛋白酶	不可逆
Leupeptin	475.6	丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶	可逆
Pepstatin A	685.9	天冬氨酸蛋白酶	可逆
EDTA	372.24	金属蛋白酶	可逆
Phenanthroline	198.22	金属蛋白酶	可逆
Phosphoramidon	587.5	金属蛋白酶	可逆
Sodium fluoride	41.99	酸性磷酸酶	可逆
Sodium pyrophosphate	221.9	丝氨酸/苏氨酸磷酸酶	不可逆
β-glycerophosphate	306.11	丝氨酸/苏氨酸磷酸酶	可逆
Imidazole	68.2	碱性磷酸酶	可逆
Sodium molybdate	205.9	酸性磷酸酶	不可逆
Sodium tartrate dihydrate	230.1	酸性磷酸酶	可逆
Sodium orthovanadate	183.91	碱性和酪氨酸磷酸酶	可逆
(-)-p-Bromotetramisole oxalate	373.22	碱性磷酸酶	不可逆
Cantharidin	196.20	蛋白磷酸酶2A	可逆
Microcystin-LR	995.17	蛋白磷酸酶1和蛋白磷酸酶2A	可逆
Calyculin A	1009.17	蛋白磷酸酶1和蛋白磷酸酶2A	可逆
Trichostatin A	302.37	class I/II HDAC	可逆
EX-527	248.71	SIRT1 over SIRT2 &SIRT3	可逆
Nicotinamide	122.12	class III HDAC	可逆
Sodium butyrate	110.09	class I/II HDAC	可逆

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名称：SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(变性)(5×)
货号：ZN1878
规格：1ml×3
产品保存：-20℃保存，一年有效
产品说明：SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液(SDS-PAGE protein Loading buffer)5×,是一种以溴酚蓝为染料的5倍浓液的蛋白上样缓冲液，试剂中含有 SDS，DTT，甘油，溴酚蓝，Tris-HCL 缓冲液等，可用于常规的SDS－PAGE 蛋白样品上样。
使用方法：
1.在室温或不超过 37℃的水浴中溶解 SDS-PAGE 上样缓冲液(5×)。水浴溶解后立即室温存放，尽量避免长时间置于水浴中。
2.按照每 4 微升蛋白样品加入 1 微升蛋白上样缓冲液(5×)的比例，混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液(5×)。
3.100℃或沸水浴加热 3-5分钟，以充分变性蛋白。
注意：如果起始时细胞或组织的用量较大，基因组 DNA 含量较高，煮沸 3-5分钟后有可能仍然比较粘稠或者有粘稠状的半透明物体。此时需要再煮沸 5-10分钟或者加入适量稀释成1×的蛋白上样缓冲液后再煮沸 3-5分钟。充分煮沸后一方面可以使结合在基因组 DNA 上的蛋白充分释放，同时会导致基因组 DNA的部分断裂从而使粘稠感消失，这样就不会影响后续的上样操作了。
4.冷却到室温后，直接上样到 SDS-PAGE 胶加样孔内即可。
5.通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。
注意事项：
1.蛋白上样缓冲液中含有少量 DTT，有轻微剌激气味。
2.SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液(5×)必须完全溶解后再使用。
3.为了您的安全和健康，请戴一次性手套在通风厨内操作。

名称：BSA PBS缓冲系统封闭液(干粉)
货号：ZN1906
规格：1包
产品保存：4℃保存，半年有效
产品特点：
1.相容性好，可用于其它的免疫检测封闭。
2.快速。
3.高信噪比，背景更干净。

名称：Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(黄色)(兔IgG)
货号：ZN1933
规格：1盒
工作原理：聚合标记法是一种酶标记方法，其敏感性比普通酶标法有明显提高。用于 Western Blotting的免疫学检测，更能体现其优点。不仅能大量地节约一抗，更重要的是使条带更清晰，甚至能检测出普通酶标法无法检测出的微量条带。DAB 是过氧化物酶最重要的显色剂之一，反应产物为不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物，适合于免疫印迹的显色反应。本产品采用特殊配方，具有操作简单，储存稳定，信号灵敏度高，持续时间长，背景低，结果易保存等优点。
保存条件：－20℃冷冻保存。DAB 显色试剂应避光保存。
有效期：一年。
试剂盒的内容：
(1)封闭试剂：10 g 蛋白干粉×2 包。
(2)浓缩抗体稀释液：20 ml×1 瓶，为10倍浓缩液。
(3)聚合过氧化物酶标记山羊抗兔IgG0.2ml，效价 1：200-400。亲和纯化抗体，经聚合法标记过氧化物酶。
(4)DAB 显色试剂，含：
显色剂 A：DAB×40倍浓缩液，3ml。
显色剂 B：H2O2×40倍浓缩液，3ml。
显色剂 C：×40倍 TBS 浓缩缓冲液，3ml。
使用说明 需要而未提供的试剂和器材：
1．转印了蛋白样品的NC 膜或PVDF 膜：通过 SDS-PAGE 凝胶电泳分离蛋白质抗原，将 PAG 胶上的蛋白质转印到硝酸纤维素膜(NC 膜)或PVDF 膜上。
2．稀释缓冲液：使用中性稀释缓冲液即 0.02 M PBS或0.02M TBS(AR0144)配制封闭液和抗体稀释液。0.02 M PBS(pH7.2-7.6)：1000 ml 蒸馏水加 Na2HPO4 2.8 g ，NaH2PO4 0.4 g，NaCl 8.5 g。如果用的是含水磷酸盐，应加上分子式中水的含量。0.02M TBS(pH7.2-7.6)：1000ml 蒸馏水中加 Tris 2.42g,NaCl 9g; 纯乙酸或浓盐酸调节 pH 值(7.2-7.6)。
3．洗涤缓冲液：每 1000ml 中性稀释缓冲液中加入 0.5 ml Tween20 即可。
4．一抗：选择适合的一抗，用抗体稀释液稀释相应的一抗，一般特异性抗体工作浓度为1μg/ml,具体的稀释度取决于特异性的一抗和膜上的抗原的量。
5．摇床：膜的封闭、抗体孵育和洗涤都需平稳摇晃，需在摇床上操作。
6．相机：记录结果。
操作程序：
1．通过聚凝胶电泳分离蛋白样本和分子量标准。
2．将蛋白样本转移至硝酸纤维素膜或PVDF 膜上。
3．封闭硝酸纤维膜：用封闭蛋白干粉 2 g,加稀释缓冲液 100 ml，20-37℃封闭 1-2 小时。用量以浸没整张膜为准。
4．用洗涤缓冲液洗涤硝酸纤维素膜 5分钟,1次。
5．配制抗体稀释液：取 90 ml 稀释缓冲液加 1 g 封闭蛋白干粉和 10 ml浓缩抗体稀释液即可。一抗、二抗均用此稀释液稀释。
6．硝酸纤维膜孵育一抗：用抗体稀释液稀释相应的一抗，一般特异性抗体浓度 1μg/ml,20-37℃孵育2 小时左右。如果缺乏特异性的条带或阳性不强，应提高一抗的浓度；如果有非特异性的条带，应提高一抗的稀释度。
7．用洗涤缓冲液振荡洗涤硝酸纤维素膜 3次,每次 5分钟。
8．硝酸纤维膜孵育二抗：用抗体稀释液稀释相应的酶标二抗，效价 1：200-400。37℃孵育一个半小时左右。用户可根据实际染*情况对稀释度做适当调整。
9．用洗涤缓冲液振荡洗涤硝酸纤维膜 4次,每次 5分钟。
10．DAB 显色:使用 DAB 显色试剂。按每 2 ml 蒸馏水加显色剂 A，B，C 各１滴，混匀。混匀后加至膜上。室温显色。一般显色 1－30分钟。
若无背景出现则可继续显色。显色后用蒸馏水洗涤以终止反应。
11．观察，照相。
注意事项：
1．试剂频繁使用时置４℃，不常使用时置－20℃。显色剂 A 需置－20℃冷冻保存。如有结晶析出，应确保结晶完全溶解再行使用。
2．显色工作液应新鲜配制。

关注去乙酰化酶抑制剂混合物，的同时，为您推荐更多您可能感兴趣的产品：

 

货号	名称	规格
YT087	免疫染色封闭液	100ml
YT091	免疫染色(非荧光)二抗稀释液	100ml
YT885	免疫染色洗涤液(10X)	100ml|10×100ml
ZN1883	彩色预染超高分子量蛋白质标准(10-20次)	100μl
ZN1894	蛋白质银染检测试剂	40次
ZN1936	Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(黄色)(山羊IgG)	1盒
ZN1937	即用型ECM试剂盒(兔IgG)	1盒

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