一管式RT-PCR试剂盒(多重荧光探针)

特别提示：包括一管式RT-PCR试剂盒(多重荧光探针)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：一管式RT-PCR试剂盒(多重荧光探针)
英文名称：One-Step Multiplex Probe qRT-PCR Kit (UDG)
产品货号：JN3008
产品规格：100T|500T

本试剂盒是以RNA为模板的一步法多重定量检测试剂盒。该试剂盒能以动物、植物和微生物的总RNA或mRNA为模板，反转录为cDNA，使用基因特异性引物进行qPCR扩增，检测探针的荧光值进行定量。cDNA合成和qPCR反应在一个管中进行，反转录结束后可直接进行qPCR扩增而不用增加额外的步骤，有助于大量样品的处理并减少污染机会。并且可以加入多对引物，在一个管中针对多个基因进行多重扩增。本试剂盒由经过特殊工艺处理的Taq DNA聚合酶、Mg2+、dNTPs等，并结合精心优化的反应缓冲液，使反应体系中所有引物都能有效延伸，无需额外优化，能在更广泛的范围内进行准确定量。

产品特点：
· 反转录和定量PCR一管完成。
· 高特异性：采用特殊工艺制造的热启动Taq DNA聚合酶，可以进行热启动法PCR反应，大大提高了PCR扩增特异性。
· 优异的多重基因扩增检测能力。

反应实例：

I．以1pg～100ng 293T细胞总RNA为模板，同时进行四重扩增GAPDH、HSD17B10、TINF和HERC基因，相比于竞品具有更好的灵敏度。


II．将5×Multiplex qRT-PCR buffer II和Multi RT Enzyme Mix II都在37℃温度下放置3天，再同时进行四重扩增GAPDH、HSD17B10、TINF和HERC基因，显示出本品很好的稳定性


试剂盒组成：
 

组分	100T
5×Multiplex qRT-PCR buffer II	400μL
Multi RT Enzyme Mix II	100μL
RNase-Free H2O	1mL
ROX Reference Dye I (ROX I)	40μL
ROX Reference Dye II (ROX II)	40μL

保存温度：-20℃保存。

使用方法：

一、配置20μL反应体系：

 

成分	用量
5×Multiplex qRT-PCR buffer II	4μl
Multi RT Enzyme Mix II	1μl
上游引物	0.2～1μM（终浓度）
下游引物	0.2～1μM（终浓度）
探针10μM	0.4μl
RNA模板	0.01～1000ng
ROX（需根据机器型号选择，见备注）	0.4μl
RNase-Free H2O	至20μl

备注：
ROX I校准的Real Time PCR仪有：
ABI5700/7000/7300/7700/7900/7900 HT/7900 HT Fast;ABI StepOne/StepOnePlus及其他仪器。
ROX II校准的Real Time PCR仪有：
ABI 7500/7500 Fast；ABI ViiA7;ABI Q6;ABI Quant Studio 6/7 Flex;StratageneMX4000/MX3500P/MX3000P及其他仪器。
不需要ROX校准的Real Time PCR仪有：
Bio-Rad CFX96/CFX 384/iCycler iQ5/iQ/MyiQ5/MiniOpticon/Opticon/Opticon/Chromo4；Eppendorf MasterCyclerrealplex/realplex 2s。Cepheid SmartCycler；Illumina Eco qPCR；Roche Applied Science LightCycler 480；Thermo Scientific PikoReal Cycler；Qiagen/Corbett Rotor-Gene Q/RotorGene 3000/Rotor-Gene 6000及其他仪器。

二、设置反应体系：

两步法扩增程序：
 

温度	时间	循环数
50℃	10min	1
94℃	1min	1
95℃	15s	40～45
60℃	30s

三步法扩增程序：
 

温度	时间	循环数
50℃	10min	1
94℃	1min	1
95℃	15s	40～45
50～60℃	20s
72℃	30s

注意事项：
1．确保所用试剂中无RNA酶污染；
2．为保证反应有效进行，需使用高质量的RNA模板。

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