LAMP恒温扩增试剂盒(浊度法,冻干制剂)

特别提示：包括LAMP恒温扩增试剂盒(浊度法,冻干制剂)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：LAMP恒温扩增试剂盒(浊度法,冻干制剂)
英文名称：Lyophilized LAMP Kit (Turbidity)
产品货号：MT0152
产品规格：50|1000T

本试剂盒基于LAMP技术，LAMP是一种新型核酸扩增技术，采用4或6条能够识别目的基因上的6个特异区域的引物，依赖于Bst DNA聚合酶的强链置换活性，在30~60分钟内DNA扩增可达10⁹～10¹⁰倍。本试剂盒为冻干制品，相对于液体型产品更加稳定，灵敏度更高，操作更加方便，通常在30min内完成检测。

Bst DNA聚合酶是Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的一部分，具有很强的链置换活性，以及5’→3’的DNA聚合酶活性，因此可以应用于LAMP实验。本制品内含Bst DNA聚合酶4.0因此既可以扩增DNA，也可以直接扩增RNA分子。

在LAMP的高效反应过程中会产生大量的焦磷酸根离子，其与镁离子结合形成焦磷酸镁白色沉淀，因此在实验过程中可通过检测反应液的浊度变化进行实时定量检测。也可在反应结束后肉眼直接观察焦磷酸镁沉淀，根据是否形成白色沉淀来判断反应是否发生。

试剂盒组成：
 

组分	规格(50T)
Lyophilized LAMP Turbidity Reagent	1瓶
LAMP Buffer	0.75ml

保存条件：-20℃，有效期一年，可常温运输。

反应实例：
以检测非洲猪瘟病毒（ASFV）为例，以标准质粒为模板，用本试剂盒检测，结果如下图


使用方法：

1．Lyophilized LAMP Turbidity Reagent为干粉形式，包含Bst DNA聚合酶4.0、dNTPs等，在未溶解前，该制品可-20℃长期保存，并可室温运输，性能无下降。使用前每瓶用750μl的LAMP Buffer溶解后，可立即使用，剩余试剂可在-20℃保存1个月，在-60℃以下长期保存。

2．按以下组分配置反应混合液
 

成分	用量
溶解后的LAMP Turbidity Reagent	15μl
LAMP Primer Mix	1 or 1.5 or 2μl
模板DNA or RNA	1μl
ddH2O	至20μl

首次实验时LAMP Primer Mix分别采用1、1.5、2μl进行实验测试。

3．反应体系配好后，充分混匀并短暂离心，置于60~65℃进行反应（首次实验采用60℃），连接LAMP实时浊度仪，对浊度变化进行实时检测。也可肉眼分别于20、25、30、45min观察浊度变化。
在LAMP反应结束后禁止将反应管盖打开，否则可能会导致气溶胶污染。一旦发生气溶胶污染，请使用百奥莱博的气溶胶DNA污染去除剂（MT3001）进行环境清理。

LAMP实验的条件优化：
1．LAMP Primer Mix浓度：FIP/BIP分别为16μM、LoopF/B分别为8μM、F3/B3分别为2μM。
2．四个重要的参数，将对成功建立LAMP检测方法至关重要，分别是引物位置、引物使用浓度、反应温度、反应时间。引物使用浓度、反应温度、反应时间是优先要确认的参数，如经过参数调整后仍不能达到检测用标准，则重新设计引物组合，再进行测试。

不同显色方法的LAMP试剂盒的比较：
 

	LAMP TaqMan	LAMP-OTG	LAMP-HNB	LAMP-浊度
货号	MT0158	MT0151	MT0153	MT0152
变色现象	荧光探针切割	橙色变绿色	紫罗兰色变天蓝色	无色变白色浑浊
检测设备	定量PCR仪或恒温荧光检测仪	肉眼可见	肉眼可见	肉眼可见或浊度仪
区分度	极易判读	极易判读	可以判读	相对不明显
灵敏度	单Copy	10Copy	10-50Copy	10-100拷贝
特异性	高特异	比较特异	一般	一般
反应温度	60~63℃	60~65℃	60~65℃	60~65℃
反应时间	15~25min	20~40min	20~40min	20~40min
反应用酶	Bst5.0	Bst4.0	Bst4.0	Bst4.0
综合推荐	★★★★★	★★★★★	★★★	★★
试剂开发难度	较易	较难	非常难	较难

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名称：LAMP可见光染料
货号：BTN130833
规格：1mL
本产品为20×浓度的LAMP核酸染料，可以直接加入到LAMP或者RT- LAMP反应体系中，随反应进行其颜色发生改变，从而实时监测反应的进程。

产品特点：
1. 实时监测LAMP或者RT-LAMP反应进行，随反应发生其颜色发生改变。如果发生LAMP扩增，颜色由反应前的紫色变成天蓝色。
2. 使用方便，不需要开盖，不需要电泳，直接定性检测LAMP反应是否发生。
3. 灵敏度高，灵敏度跟SYBR Green I相当(但SYBR染料需要UV激发)，本产品的激发光是自然光。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将本产品放置在室温融化，然后震荡10秒钟，短暂离心后待用。
2. 将本染料按LAMP反应体系总体积的1/20加入到LAMP扩增反应液中。
以20μL体系为例：
 

成分	样品管	阴性对照
LAMP Mix(2×)	10μl	10μl
FIP引物终浓度	0.8μM	0.8μM
BIP引物终浓度	0.8μM	0.8μM
F3引物终浓度	0.2μM	0.2μM
B3引物终浓度	0.2μM	0.2μM
Loop F引物终浓度(可选项)	0.4μM	0.4μM
Loop B引物终浓度(可选项)	0.4μM	0.4μM
MgCl2(25mM)	3μL	3μL
模板DNA	1-100ng	不加
Bst DNA聚合酶(8U/μL)	1.5μl	1.5μl
LAMP可见光染料	1μl	1μl
补水到	20μl	20μl

3. 观察反应液颜色变化，如果发生LAMP扩增，颜色由反应前的紫色变成天蓝色。

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