Bradford蛋白浓度测定试剂盒(兼容去垢剂)

特别提示：包括Bradford蛋白浓度测定试剂盒(兼容去垢剂)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Bradford蛋白浓度测定试剂盒(兼容去垢剂)
英文名称：Detergent Compatible Bradford Protein Assay Kit
产品货号：YTB0034
产品规格：800T

本试剂盒基于Bradford法研制而成，实现了蛋白浓度测定的快速、稳定和高灵敏度，能兼容一系列常见去垢剂，并且检测数据有很好的线性关系。本试剂盒的性能不仅优于常规的Bradford法，和BCA法比也更加快速便捷。

本试剂盒和常规的Bradford蛋白浓度测定试剂盒相比可以兼容一系列常见的去垢剂，和BCA法相比，能兼容高浓度的还原剂，并且检测速度极快，在检测含去垢剂样品蛋白浓度时，比BCA法更加便捷。生命科学研究中的很多蛋白样品都是含有去垢剂的，因此常规Bradford法的使用受到了很大的限制，通常只能使用可以兼容去垢剂但检测比较耗时的BCA法。如果使用本试剂盒，不仅能兼容去垢剂，而且由于能立即显色，检测速度会比BCA法快很多。当蛋白样品中同时含有一定浓度的去垢剂和还原剂时，常规的Bradford法和BCA法就都不能使用了，而本试剂盒仍然是可以检测的。

Bradford法的原理是考马斯亮兰(Coommassie Brilliant Blue)G-250与蛋白质的碱性和芳香族氨基酸特别是精氨酸(Arginine)在酸性介质中结合后，溶液转变为蓝色，溶液最大吸收峰从465nm迁移到595nm，颜色的变化与蛋白质浓度成正比。因此，可通过检测595nm处的吸光度对溶液中蛋白质浓度进行测定。

本试剂盒标准曲线的线性关系好。常规的Bradford法的标准曲线是非线性的。本试剂盒进行了精心优化，不仅能兼容上述的去垢剂，还能确保10μl体积的样品或标准品在0.1-1.5mg/ml浓度范围内有良好的线性关系。

与测定蛋白浓度的其它方法如BCA法和Lowry相比，本试剂盒测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，尤其是还原试剂和去垢剂的影响。样品中β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)的浓度可高达1M，二硫苏糖醇(DTT)的浓度可高达5mM。同时本试剂盒还能兼容上述各种常见的去垢剂。BCA法能耐受各种常见的去垢剂，但不能耐受高浓度的还原剂。

试剂盒特点：
 

• 检测速度极快：10-20个样品只需不足10分钟即可完成，和BCA法相比大大缩短了检测时间。


• 检测灵敏度高：最小蛋白检测量达到0.5μg。


• 兼容去垢剂：测定蛋白浓度时不受较高浓度去垢剂的影响，可以很好地兼容1% Triton X-100、1% Tween 20、1% SDS、1% NP-40和1% Brij35等去垢剂。

试剂盒组成：
 

组分	规格
G250染色液(去垢剂兼容型)	125ml×2
蛋白标准(20mg/ml BSA)	1ml
说明书	1份

保存条件：4℃保存，一年有效。蛋白标准可以-20℃长期保存。

注意事项：
 

• 蛋白标准请在全部溶解后先混匀，再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。


• 将G250染色液(去垢剂兼容型)回复到室温再使用，有利于提高检测的灵敏度。


• 需可检测560-610nm之间波长的酶标仪一台，最佳检测波长为595nm。并需96孔板。。


• 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。


• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
 

• 蛋白标准的准备
   
  • 蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。为简便起见，如果蛋白样品所在溶液不含有去垢剂，也可以用0.9%NaCl、PBS或水稀释标准品。蛋白标准(20mg/ml BSA)如果冻存，请完全融化并混匀后使用。
  
  
  • 按照下表配制0、0.125、0.25、0.5、0.75、1、1.5mg/ml蛋白标准。每次稀释时注意充分混匀。如果有必要可以增加设置0.0625mg/ml的蛋白标准。
     

    编号	稀释液体积	标准品体积	最终浓度
    A	92.5μl	20mg/ml BSA 7.5μl	1.5mg/ml
    B	30μl	从A管取60μl	1mg/ml
    C	20μl	从B管取60μl	0.75mg/ml
    D	30μl	从C管取60μl	0.5mg/ml
    E	60μl	从D管取60μl	0.25mg/ml
    F	60μl	从E管取60μl	0.125mg/ml
    G	60μl	0μl	0mg/ml



• 蛋白浓度测定
   
  • 取10μl不同浓度蛋白标准加到96孔板的蛋白标准孔中。
  
  
  • 取10μl样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足10μl，需加标准品稀释液补足到10μl。请注意记录样品体积。
  
  
  • 各孔加入300μl G250染色液(去垢剂兼容型)。
  
  
  • 用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度，也可以在30分钟内测定，30分钟内检测数据无显著变化。对于不含去垢剂和含有某些去垢剂的情况，在2小时内检测数据无显著变化；对于含有某些特定去垢剂的情况，在2小时内检测数据会有一定的变化，但仍然会呈现较好的线性关系。
  
  
  • 根据标准曲线和使用的样品体积计算出样品中的蛋白浓度。

根据您的关注的Bradford蛋白浓度测定试剂盒(兼容去垢剂)，您可能还对以下产品有需求：


BTN120705 L-谷胱甘肽(还原型) 5g
WE0260 组织蛋白抽提试剂盒 25次|100次
SNM433 WB二抗稀释液 100ml
RFT079 Western半干转转膜液 10×1L
SY0316 RIPA裂解液(中) 100ml
SY0346 考马斯亮蓝R250 10g|25g
SY0416 36mm透析袋(透析分子量14kDa) 1卷（5米）
QN1155 ECL化学发光法检测试剂盒(小鼠/兔IgG) 1盒

关注Bradford蛋白浓度测定试剂盒(兼容去垢剂)，的同时，为您推荐更多您可能感兴趣的产品：



名称：超敏型BCA法蛋白定量试剂盒
货号：BTN80816
规格：500次
本产品是在BCA法蛋白定量试剂盒(BTN80815)基础上改进的超敏蛋白定量试剂盒，尤其适合对低浓度的蛋白质溶液进行定量分析。

产品特点：
1．超敏感，最低检测浓度为0.5μg/mL。
2．线性范围在 0.5～20μg/mL，尤其适用于低浓度的样品。
3．对大多数离子型和非离子型去污剂不敏感，但对Cu的还原剂和螯合剂敏感。
4．比 Lowry法更加简单快捷，45分钟内完成测定。
5．试剂稳定，室温可以放置两年，工作液1 天内有效。
6．终产物稳定，检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
7．最短可以检测双肽，所以适合于分子量较小的蛋白质，而Bradford法需要一定大小的蛋白质。

试剂盒组成：
 

成分	规格
溶液A	250ml
溶液B	250ml
溶液C	10ml
BSA标准品(2mg/mL)	1ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存(但BSA 标准品需要低温运输，-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：(96板操作模式)
1．将本试剂盒提供的BSA标准品用自备的样品缓冲液稀释成浓度为0.04μg/uL的工作液待用(一次测试所需BSA标准品工作液的用量参见下表)。
2．取一块96孔板，先进行编号(编号可以根据样品数增加)，并按照下表加入BSA工作液、待测样品和样品缓冲液：
 

编号	BSA工作液 (μL)	待测样品 (μL)	样品缓冲液 (μL)	总体积 (μL)	蛋白含量 (μg)
0	0	0	150	150	0
1	5	0	145	150	0.2
2	10	0	140	150	0.4
3	20	0	130	150	0.8
4	40	0	110	150	1.6
5	60	0	90	150	2.4
6	80	0	70	150	3.2
7	100	0	50	150	4.0
样品1	0	?μl	补到150	150	未知
样品N	0	?μl	补到150	150	未知

3．计算 BCA工作液需要量：根据样品数量(包括制备标准曲线的样品的数量)和每个样品需要0.15mL BCA工作液的比例，计算所需BCA工作液的用量。
4．配制 BCA工作液：先将溶液A、溶液B和溶液C按50：48：2的比例混合，所得溶液即BCA工作液。比如：5mL溶液A + 4.8mL溶液B + 200μL溶液C。
5．将1倍体积(即150μL)的BCA工作液加入到各孔中并混匀。如果用排枪加入并混匀则更好。也可把96孔板放在振荡器上振荡30秒混匀。
6．60℃放置1小时。
7．冷至室温，10分钟内完成后续测定，否则化学反应还在继续进行，光吸收值会慢慢升高，每10分钟会升高2.5%左右。
8．在 562nm下比色测定其余样品的光吸收。如酶标仪没有562nm的设定，可用接近的波长检测，如570nm。
9．将编号为0 号的样品(对照)的读数从其余所有样品(包括0 号样品，其读数变成零)中扣除。
10．以0-7 号样品的BSA含量(μg，见上表最右行)为横坐标，以上一步得到的这几个样品的吸光值为纵坐标，绘出BSA的标准曲线。
11．再将待测样品的吸光值(减去0 号样品的读数后)标在标准曲线上，其在横坐标上对应的蛋白含量(μg)就是待测样品中的蛋白质含量，除以样品稀释液总体积(20μL)，乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度(单位：μg/uL)。

注意事项：
1．加工作液后也可以在室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。所以，如果蛋白质浓度较低，可以改在60℃孵育60分钟。
2．待测样品浓度在20～2000 微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。
3．在一定浓度范围内BCA法测定蛋白浓度不受下列化学物质的影响：
 

名称	在此浓度下不受影响
Ammonium Sulfate	1.5 M
Brij-35	5.0%
CHAPS	5.0%
EDTA	10mM
Hepes	100mM
Glycine，pH2.8	100mM
Guanidine HCl	4.0 M
Tween 20、60、80	5.0%
SDS	5.0%
Sodium Acetate pH5.5	200mM
Sodium Chloride(NaCl)	1.0 M
Sucrose	40%
Sodium Hydroxide(NaOH)	0.1 M
NP-40	5.0%
Triton X-100	5.0%
Urea	3.0 M

4．本方法受样品中螯合剂和还原剂的影响，所以需确保EDTA浓度不高于10mM，二硫苏糖醇不高于1mM，β-巯基乙醇不高于1mM，没有任何 EGTA，否则建议使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒(BTN80815)。
5．本试剂受温度和时间影响较大，故需要准确定时和定温，以保证精确定量。

北京百奥莱博科技有限公司一家专注于生命科学研究领域的生物技术公司，坚持“质量至上，服务为本，全心全意助力生命科学”的理念，为广大用于提供稳定、可靠、专业的产品和服务支持，产品线包括分子生物学，细胞生物学，免疫检测，抗体，重组蛋白，血液制品等系列。“忙忙碌碌的平凡，铸就事业的不凡”。让我们携起手来，共同创造生命科学的蓬勃发展。