LAMP恒温扩增试剂盒(SYBR染料法,冻干制剂)

特别提示：包括LAMP恒温扩增试剂盒(SYBR染料法,冻干制剂)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：LAMP恒温扩增试剂盒(SYBR染料法,冻干制剂)
英文名称：Lyophilized LAMP Kit(SYBR Green)
产品货号：MT0150
产品规格：50|1000T

本试剂盒通过加入SYBR Green染料对LAMP扩增进行实时监测，需要配备荧光定量PCR仪或恒温扩增荧光检测仪，且对引物的要求比较高，特异性高的引物可更好的避免假阳性的出现。

LAMP是一种新型核酸扩增技术，采用4或6条能够识别目的基因上的6个特异区域的引物，依赖于Bst DNA聚合酶的强链置换活性，在30~60分钟内DNA扩增可达10⁹~10¹⁰倍。

Bst DNA聚合酶是Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的一部分，具有很强的链置换活性，以及5’→3’的DNA聚合酶活性，因此可以应用于LAMP(Loop-mediated isothermal amplification)检测实验。该制品内含Bst DNA聚合酶4.0因此既可以扩增DNA，也可以直接扩增RNA分子。

试剂盒组成：
 

组分	规格(50T)
Lyophilized LAMP SYBR Green Reagent	1瓶
LAMP Buffer	0.75ml

保存条件：-20℃，有效期一年。

反应实例：
以AFSV标准质粒和病料提取的基因组DNA为模板应用本试剂盒和6条引物进行LAMP SYBR Green反应，NTC为不加模板的对照，结果如图。


使用方法：

1．Lyophilized LAMP SYBR Green Reagent为冻干粉形式，包含Bst DNA聚合酶4.0、dNTPs等，在未溶解前，该制品可-20℃长期保存，并可室温运输，性能无下降。使用前每瓶用0.75ml的LAMP Buffer溶解后，可立即使用，剩余试剂可在-20℃保存1个月，在-60℃以下长期保存。

2．按以下组分配置反应混合液：
 

成分	用量
溶解后的LAMP SYBR Green Reagent	15μl
LAMP Primer Mix	0.5 or 1 or 1.5μl
模板DNA or RNA	1μl
ddH2O	至20μl

首次实验时LAMP Primer Mix分别采用0.5、1、1.5μl进行实验测试。

3．荧光定量PCR仪的设置LAMP SYBR Green的检测可以使用标准定量PCR仪（也可使用恒温荧光设备）。
使用定量PCR仪进行LAMP SYBR Green扩增程序：
步骤1：60℃ 10s
步骤2：60℃ 50s收集信号，循环25次
总反应时间为25min。

在LAMP反应结束后禁止将反应管盖打开，否则可能会导致气溶胶污染。一旦发生气溶胶污染，请使用我司的DNA气溶胶污染去除剂（货号：MT3001）进行环境清理。

LAMP实验的条件优化：
1．LAMP Primer Mix浓度：FIP/BIP分别为16μM、LoopF/B分别为8μM、F3/B3分别为2μM。
2．对成功建立LAMP检测方法至关重要的四个参数分别是：引物位置、引物使用浓度、反应温度（60~65℃）和反应时间。引物使用浓度、反应温度是优先要确认的参数，如经过参数调整后仍不能达到检测用标准，则重新设计引物组合，再进行测试。

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